Određivanje krvne grupe i Rh faktora igra osnovnu ulogu u slučajevima kada je u pitanju spašavanje života osobe. Iz tog razloga se ovakva studija radi na svim pacijentima u preoperativnom periodu, na trudnicama prije porođaja iu mnogim drugim situacijama koje mogu zahtijevati hitnu transfuziju. Postoji nekoliko načina za određivanje krvne grupe pomoću različitih laboratorijskih reagensa, a jedan od njih se temelji na upotrebi kemikalija koje se zovu zolikloni. Šta je određivanje krvne grupe pomoću zoliklona i kako se izvodi postupak?

Grupa i Rh faktor su genetski određene karakteristike krvi koje su naslijeđene od roditelja i ostaju nepromijenjene tijekom cijelog života osobe. Klasifikacija krvnih grupa vrši se na osnovu određenog skupa biohemijskih parametara i sastava antigena, a ima 4 glavne grupe. Transfuzija pacijentu krvi nekompatibilne grupe ili sa drugačijim Rh faktorom nosi sa sobom smrtnu opasnost - imunološki sistem počinje proizvoditi antitijela protiv stranih ćelija koje ih napadaju i uništavaju. Upravo iz tog razloga je u situacijama koje nose rizik od velikog gubitka krvi potrebno precizno odrediti krvni identitet i Rh faktor i davaoca i primatelja.

Šta su zolikloni?

Kolikloni su antitijela koja se proizvode tehnologijom genetskog inženjeringa. Obično se za dobivanje zolikona uzimaju laboratorijski miševi - životinjama se ubrizgava poseban lijek, nakon čega se uzima tekućina iz trbušne šupljine - to je ono što sadrži tvari potrebne za analizu. Sa naučne tačke gledišta, ciklokloni se mogu klasifikovati kao imunoglobulini M, koji su u stanju da reaguju sa aglutinogenima - specifičnim ćelijama prisutnim na površini crvenih krvnih zrnaca.

Upravo aglutinogeni, odnosno njihove vrste, služe kao osnova za klasifikaciju krvnih grupa: na primjer, nosioci prve grupe nemaju ove supstance, vlasnici druge imaju aglutinogene tipa A itd. Tokom postupka, određeni zolikloni reagiraju s različitim tipovima aglutinogena, što nam omogućava da odredimo krvnu grupu pacijenta.

Cilikloni se proizvode u obliku tečnosti, flaširani u boce od 5 ml ili 10 ml, a svaka vrsta ima specifične karakteristike:

• anti-A je crvenkasta tečnost;
• anti-B ima plavu nijansu;
• anti-AB (anti-D)– bezbojni prozirni rastvor.

Prednost zolikona u odnosu na druge hemijske reagense je u tome što ne zahtevaju posebnu pripremu za analizu i omogućavaju njeno izvođenje u najkraćem mogućem roku. Osim toga, one nisu ćelije ljudskog tijela, pa je infektivna kontaminacija medicinskog osoblja u kontaktu sa supstancama potpuno isključena.

Kako se provodi istraživanje?

Za određivanje krvne grupe pomoću ciklona potrebna vam je ravna, ravna površina (ploča) navlažena vodom, set kemijskih reagensa i uzoraka bioloških tekućina, a stručnjak može koristiti bilo koju krv: kapilarnu, vensku, smrznutu itd.

1. Strane tablete su označene kako se ne bi zbunile koje će se od njih primijeniti na jednu ili drugu vrstu zoliklona.
2. Jedna kap reagensa (obično anti-A i anti-B cikloni) i krvi se ispuštaju na površinu, a zapremina hemikalija treba da bude 8-10 puta veća od zapremine biomaterijala.
3. Sačekajte 3-5 minuta, lagano ljuljajući ploču tako da se tečnosti dobro izmešaju i da se crvena krvna zrnca ne talože oko ivica uzoraka.

Bitan! Nakon nekoliko minuta nastupit će reakcija po kojoj je moguće s velikom preciznošću utvrditi pripada li krv određenoj grupi.

Interpretacija rezultata postupka provodi se vizualno - tekućine se ili potpuno spajaju, ili dolazi do lijepljenja (aglutinacije) krvnih stanica, uslijed čega se biomaterijal zgrušava i u njemu se formiraju male ljuspice.

Dešifriranje se vrši na sljedeći način:

• ako reakcija nema u svim uzorcima biomaterijala, može se klasificirati kao grupa I (to znači da u krvnim stanicama nema aglutinogena);
• ulazak krvnih zrnaca u reakciju sa anti-A zolikonom ukazuje da krv osobe koja se proučava pripada grupi II;
• lijepljenje eritrocita anti-B koliklonom je znak III krvne grupe;
• ako je biomaterijal reagovao sa svim supstancama, onda pripada grupi IV.

Da bi se provjerila tačnost rezultata i odredio Rh faktor, uzorcima biomaterijala se dodaje tsoliklon AB - ako dođe do reakcije aglutinacije, utvrđuje se da je pozitivna u krvi (odsustvo adhezije crvenih krvnih zrnaca ukazuje na negativan Rh faktor ). Da bi se isključile bolesti kod kojih dolazi do aglutinacije u kontaktu s bilo kojim nadražujućim tvarima, kap pacijentove krvi se pomiješa sa fiziološkom otopinom. U slučajevima kada je nemoguće vizualno odrediti rezultat, analiza se ponavlja, a uzorci se pregledavaju pod mikroskopom.

Table. Reakcije različitih krvnih grupa sa anti-A i anti-B zoliklonom.

Šta biste trebali uzeti u obzir prilikom provođenja analize?

Da bi rezultat analize bio što pouzdaniji, tokom postupka mora biti ispunjen niz uslova:

• reagense treba čuvati na hladnom mjestu na temperaturi od +2-8 stupnjeva u bocama sa čvrsto zategnutim poklopcem (ako se krše pravila skladištenja, brzo gube svojstva);
• Za analizu ne možete koristiti ciklone kojima je istekao rok trajanja (oko 30 dana) ili tekućine koje sadrže sediment, ljuspice ili krhotine;
• studija se izvodi u dobro osvijetljenoj prostoriji na temperaturi zraka ne nižoj od +15 i ne višoj od +25 stupnjeva, a ne bi trebalo biti prljavštine, prašine ili drugih faktora koji mogu iskriviti rezultat;

  Temperatura vazduha tokom postupka mora biti

• pri nanošenju biomaterijala i reagensa na površinu tablete, moraju se strogo poštovati proporcije - ako ima previše krvi, reakciju je teže pratiti, au suprotnom slučaju (s malim volumenom) bit će prespora ;
• Kapljice krvi pomiješane s različitim vrstama zoliklona ne treba dozvoliti da se spoje – ako se to dogodi, test se ponovo provodi; iz istog razloga treba koristiti različite štapiće za miješanje reagensa s biomaterijalom.

Trajanje reakcije treba da bude najmanje 3 minuta, a ako je rezultat upitan, vreme posmatranja uzoraka biomaterijala treba produžiti na 5 minuta. Međutim, nakon 10 minuta, biomaterijal se može osušiti i crvena krvna zrnca mogu prirodno precipitirati, tako da ne biste trebali vjerovati takvoj studiji.

Šta može uticati na rezultat?

Zolikloni su osjetljivi na faktore okoline, stoga je prilikom istraživanja potrebno poštivati ​​temperaturne uvjete i higijenska pravila - prostorija mora biti čista i suha, a pojedinačni uzorci krvi ne smiju doći u dodir jedni s drugima. Osim toga, u nekim patologijama ljudska krv može promijeniti svoje karakteristike, zbog čega istraživanje postaje znatno kompliciranije. Dakle, kod poremećaja funkcije jetre, slezene, septičkih procesa i opsežnih opekotina, pacijenti doživljavaju takozvanu panaglutinaciju krvi - crvena krvna zrnca precipitiraju čak i kada reagiraju sa fiziološkom otopinom. Kod pacijenata s leukemijom i novorođenčadi uočava se drugačija slika - krvna zrnca ne reagiraju na podražaje, što onemogućuje praćenje reakcije adhezije.

Bilješka! Osim toga, kod blizanaca, osoba sa transplantacijom koštane srži ili onih koji su bili podvrgnuti višestrukim transfuzijama krvi, različite vrste crvenih krvnih zrnaca koegzistiraju u biološkim tekućinama - shodno tome, tokom analize se uočavaju nepredvidivi rezultati. Za određivanje grupe u gore navedenim slučajevima potrebna su dodatna laboratorijska ispitivanja pomoću posebne opreme.

Analiza pomoću zoliklona jedan je od najjednostavnijih i najpreciznijih načina za određivanje krvne grupe osobe. Ako se poštuju sva pravila i uvjeti postupka, vjerojatnost pogrešnog rezultata je minimizirana, zbog čega se kemijski reagensi ove vrste koriste u gotovo svim modernim laboratorijama.

Video - Određivanje krvnih grupa pomoću zoliklona

OPĆE ODREDBE

ABO sistem krvnih grupa sastoji se od dvije grupe aglutinogena - A i B i dva odgovarajuća aglutinina u plazmi - alfa (anti-A) i beta (anti-B). Različite kombinacije ovih antigena i antitela formiraju četiri krvne grupe: grupa 0(1) - oba antigena su odsutna; grupa A (II) - samo antigen A je prisutan na crvenim krvnim zrncima; grupa B (III) - samo antigen B je prisutan na eritrocitima; grupa AB (IV) - antigeni A i B su prisutni na crvenim krvnim zrncima.

Jedinstvenost ABO sistema je u tome što u plazmi neimuniziranih osoba postoje prirodna antitela na antigen kojih nema na crvenim krvnim zrncima: kod osoba grupe 0(1) - antitela na A i B; kod osoba grupe A (II) - anti-B antitela; kod osoba grupe B(III) - anti-A antitela; osobe grupe AB(IV) nemaju antitela na antigene ABO sistema.

U daljem tekstu anti-A i anti-B antitijela će se nazivati ​​anti-A i anti-B.

Određivanje ABO krvne grupe vrši se identifikacijom specifičnih antigena i antitijela (dvostruka ili unakrsna reakcija). Anti-A i anti-B se detektuju u serumu pomoću standardnih crvenih krvnih zrnaca A(II) i B(III). Prisustvo ili odsustvo antigena A i B na eritrocitima određuje se upotrebom monoklonskih ili poliklonskih antitijela (standardni hemaglutinirajući serumi) odgovarajuće specifičnosti.

Određivanje krvne grupe vrši se dva puta: primarna studija - na medicinskom odjelu (tim za vađenje krvi); potvrdno istraživanje - u laboratorijskom odjelu. Algoritam za provođenje imunohematoloških laboratorijskih testova tokom transfuzije krvi prikazan je na Sl. 18.1.

Rezultat utvrđivanja krvne grupe bilježi se u gornjem desnom uglu prednjeg lista anamneze ili u dnevniku (kartici) davaoca, sa naznakom datuma i potpisom ljekara koji je izvršio određivanje.

Na severozapadu Rusije, distribucija ABO krvnih grupa u populaciji je sledeća: grupa 0(I) - 35%; grupa A(II) - 35-40%; grupa B(III) - 15-20%; grupa AB (IV) - 5-10%.

Treba napomenuti da postoje različite vrste (slabe varijante) i antigena A (u većoj meri) i antigena B. Najčešći tipovi antigena A su A 1 i A 2. Prevalencija A 1 antigena kod osoba grupa A (II) i AB (IV) je 80%, a A 2 antigena oko 20%. Uzorci krvi koji sadrže A2 mogu sadržavati anti-A1 antitela koja reaguju sa crvenim krvnim zrncima standardne grupe A(II). Prisustvo anti-A 1 detektuje se unakrsnim određivanjem krvnih grupa i tokom individualnog testa kompatibilnosti.

Za diferencirano određivanje varijanti antigena A (A 1 i A 2) potrebno je koristiti specifične reagense (fitohemaglutinini ili monoklonska antitela anti-A 1. Pacijenti grupe A 2 (II) i A 2 B (IV) moraju biti transfuzirane hemokomponentama koje sadrže eritrocite grupe A 2 (II) i A 2 B (IV). Mogu se preporučiti i transfuzije ispranih crvenih krvnih zrnaca: 0(I) - pacijenti sa krvnom grupom A 2 (II); 0(I) i B(III) - pacijenti sa krvnom grupom A 2 B(II).

Tabela 18.4. Rezultati određivanja ABO krvne grupe
Rezultati istraživanja						Grupna pripadnost krvi koja se testira
crvenih krvnih zrnaca sa reagensom			serum (plazma) sa standardnim crvenim krvnim zrncima
anti-AV	anti-A	anti-B	0(I)	A(II)	B (III)
-	-	-	-	+	+	0(I)
+	+	-	-	-	+	A(II)
+	-	+	-	+	-	B(III)
+	+	+	-	-	-	AB(IV)
Oznake: + - prisustvo aglutinacije, - - odsustvo aglutinacije

Određivanje krvne grupe prema ABO sistemu

Krvne grupe se određuju pomoću standardnih seruma (jednostavna reakcija) i standardnih eritrocita (dvostruka ili unakrsna reakcija).

Krvna grupa se određuje jednostavnom reakcijom pomoću dvije serije standardnih izohemaglutinirajućih seruma.

• Napredak odlučnosti [prikaži] .

  Određivanje krvne grupe vrši se pri dobrom osvjetljenju i temperaturi od + 15 do + 25 ° C na tabletama. 0(1) je napisano na lijevoj strani tablete, A(II) u sredini, a B(III) na desnoj strani. Na sredini gornjeg ruba tablete označite ime davaoca ili broj krvi koja se testira. Koristite aktivne standardne serume tri grupe (O, A, B) sa titrom od najmanje 1:32, u dvije serije. Serumi se stavljaju u posebne police u dva reda. Svaki serum ima označenu pipetu. Za dodatnu kontrolu koristi se serum grupe AB(IV).

  Jedna ili dvije kapi standardnog seruma se nanose na tabletu u dva reda: serum grupe 0 (1) - lijevo, serum grupe A (II) - u sredini, serum grupe B (III) - na u pravu.

  Kapi krvi iz prsta ili epruvete nanose se pipetom ili staklenim štapićem blizu svake kapi seruma i pomiješaju štapićem. Količina krvi treba da bude 8-10 puta manja od seruma. Nakon miješanja, ploča ili tableta se lagano ljulja u rukama, što pospješuje bržu i precizniju aglutinaciju crvenih krvnih zrnaca. Kako dođe do aglutinacije, ali ne prije nego nakon 3 minute, kapima seruma sa crvenim krvnim zrncima gdje je došlo do aglutinacije dodaje se jedna kap 0,9% rastvora natrijum hlorida i nastavlja se posmatranje dok ne prođe 5 minuta. Nakon 5 minuta, očitajte reakciju u propuštenoj svjetlosti.

  Ako je aglutinacija nejasna, u mješavinu seruma i krvi se dodatno dodaje jedna kap 0,9% otopine natrijum hlorida, nakon čega se daje zaključak o grupnoj pripadnosti (tabela 18.4).

• Rezultati reakcije [prikaži] .
  1. Odsustvo aglutinacije u sve tri kapi ukazuje da u krvi koja se ispituje nema aglutinogena, odnosno da krv pripada grupi 0(I).
  2. Početak aglutinacije u kapima sa serumima 0(I) i B(III) ukazuje da u krvi postoji aglutinogen A, odnosno da krv pripada grupi A(II).
  3. Prisustvo aglutinacije u kapima sa serumima grupe 0(I) i A(II) ukazuje da krv koja se ispituje sadrži aglutinogen B, odnosno krv grupe B(III).
  4. Aglutinacija u sve tri kapi ukazuje na prisustvo aglutinogena A i B u krvi koja se ispituje, odnosno da krv pripada grupi AB (IV). Međutim, u ovom slučaju, s obzirom da je moguća aglutinacija sa svim serumima zbog nespecifične reakcije, potrebno je na tabletu ili ploču nanijeti dvije ili tri kapi standardnog seruma grupe AB (IV) i dodati 1 kap testa. krv im. Serum i krv se pomiješaju i rezultat reakcije se promatra 5 minuta.

     Ako ne dođe do aglutinacije, krv koja se ispituje se klasifikuje kao grupa AB(IV). Ako se aglutinacija pojavi sa serumom grupe AB (IV), onda je reakcija nespecifična. U slučaju slabe aglutinacije iu svim sumnjivim slučajevima, krv se ponovo testira standardnim serumima iz drugih serija.

Određivanje ABO krvne grupe dvostrukom reakcijom
(na osnovu standardnih seruma i standardnih eritrocita)

Standardna crvena krvna zrnca su 10-20% suspenzija svježih nativnih crvenih krvnih stanica (ili test stanica ispranih od konzervansa) grupa 0(I), A(II) i B(III) u 0,9% otopini natrijum hlorida ili citratu - fiziološki rastvor. Nativna standardna crvena krvna zrnca mogu se iskoristiti u roku od 2-3 dana ako se čuvaju u izotoničnom fiziološkom rastvoru na temperaturi od +4°C. Konzervirana standardna crvena krvna zrnca čuvaju se na +4°C 2 mjeseca i ispiru se od otopine konzervansa prije upotrebe.

Ampule ili bočice sa standardnim serumima i standardnim crvenim krvnim zrncima stavljaju se u posebne police sa odgovarajućim oznakama. Za rad sa reagensima za tipkanje koristite suhe, čiste pipete, odvojene za svaki reagens. Za pranje staklenih (plastičnih) štapića i pipeta pripremite čaše sa 0,9% rastvorom natrijum hlorida.

Za određivanje grupe uzmite 3-5 ml krvi u epruvetu bez stabilizatora. Krv treba stajati 1,5-2 sata na temperaturi od +15-25°C.

• Napredak odlučnosti [prikaži] .

  Na tabletu se nanose dvije kapi (0,1 ml) standardnih seruma grupa 0(I), A(II), B(III) iz dvije serije. Shodno tome, svakoj grupi seruma se daje jedna mala kap (0,01 ml) standardnih eritrocita grupa 0(I), A(II), B(III). Jedna kap test krvi se dodaje standardnim serumima, a dvije kapi test seruma se dodaju standardnim eritrocitima. Količina krvi treba da bude 8-10 puta manja od seruma. Kapi se miješaju staklenim štapićem i, mućkajući tabletu u rukama 5 minuta, pratite početak aglutinacije. Ako je aglutinacija nejasna, u mješavinu seruma i krvi se dodaje dodatna kap 0,9% otopine natrijum hlorida (0,1 ml), nakon čega se donosi zaključak o pripadnosti grupi (tabela 18.4).

• Procjena rezultata određivanja ABO krvne grupe [prikaži] .
  1. Prisustvo aglutinacije sa standardnim eritrocitima A i B i odsustvo aglutinacije u tri standardna seruma od dvije serije ukazuje na to da test serum sadrži oba aglutinina - alfa i beta, te da nema aglutinogena u ispitivanim eritrocitima, odnosno krvi. pripada grupi 0 (I) .
  2. Prisustvo aglutinacije sa standardnim serumima grupa 0(I), B(III) i sa standardnim eritrocitima grupe B(III) ukazuje da test eritrociti sadrže aglutinogen A, a test serum aglutinin beta. Dakle, krv pripada grupi A (II).
  3. Prisustvo aglutinacije sa standardnim serumima grupa 0(I), A(II) i sa standardnim eritrocitima grupe A(II) ukazuje da test eritrociti sadrže aglutinogen B, a test serum aglutinin alfa. Dakle, krv pripada grupi B (III).
  4. Prisustvo aglutinacije sa svim standardnim serumima i odsustvo aglutinacije sa svim standardnim eritrocitima ukazuje da ispitivani eritrociti sadrže oba aglutinina, odnosno da krv pripada grupi AB (IV).

Određivanje krvne grupe
korištenjem anti-A i anti-B zoliklona

Anti-A i anti-B zolikloni (monoklonska antitela na antigene A i B) namenjeni su za određivanje krvne grupe ljudskog ABO sistema umesto standardnih izohemaglutinirajućih seruma. Za svako određivanje krvne grupe koristi se jedna serija anti-A i anti-B reagensa.

• Napredak odlučnosti [prikaži] .

  Jedna velika kap anti-A i anti-B zoliklona (0,1 ml) se nanosi na tabletu (ploču) ispod odgovarajućih natpisa: “Anti-A” ili “Anti-B”. Jedna mala kap krvi koja se ispituje stavlja se u blizini (omjer krvnog reagensa je 1:10), zatim se reagens i krv pomiješaju i napredak reakcije se posmatra laganim protresanjem tablete ili ploče.

  Aglutinacija sa anti-A i anti-B koliklonima obično se javlja unutar prvih 5-10 s. Posmatranje treba provoditi 2,5 minuta, zbog mogućnosti kasnijeg početka aglutinacije sa crvenim krvnim zrncima koja sadrže slabe tipove antigena A ili B.

• Procjena rezultata reakcije aglutinacije sa anti-A i anti-B ciklonima prikazana je u tabeli. 18.4, koji takođe uključuje rezultate određivanja aglutinina u serumu donora pomoću standardnih eritrocita.

Ako se sumnja na spontanu aglutinaciju kod osoba sa krvnom grupom AB(IV), vrši se kontrolna studija sa 0,9% rastvorom natrijum hlorida. Reakcija mora biti negativna.

Coliclones anti-A (ružičasti) i anti-B (plavi) dostupni su u nativnom i liofiliziranom obliku u ampulama od 20, 50, 100 i 200 doza sa otapalom prikačenim na svaku ampulu, 2, 5, 10, 20 ml. .

Dodatna kontrola za ispravno određivanje ABO krvne grupe pomoću anti-A i anti-B reagensa je monoklonski anti-AB reagens (Hematolog, Moskva). Preporučljivo je koristiti anti-AB reagens paralelno sa poliklonalnim imunim serumima i monoklonskim reagensima. Kao rezultat reakcije sa anti-AB reagensom, razvija se aglutinacija eritrocita grupa A (II), B (III) i AB (IV); eritrociti grupe 0(I) nemaju aglutinaciju.

GREŠKE U ODREĐIVANJU ČLANSTVA U GRUPI

Greške u određivanju krvnih grupa mogu zavisiti od tri razloga:

1. tehnički;
2. inferiornost standardnih seruma i standardnih eritrocita;
3. biološke karakteristike krvi koja se ispituje.

Greške zbog tehničkih razloga uključuju:

• a) nepravilno postavljanje seruma na ploču;
• b) netačni kvantitativni odnosi seruma i eritrocita;
• c) upotreba nedovoljno čistih tableta i drugih predmeta koji dolaze u kontakt sa krvlju. Za svaki serum treba postojati posebna pipeta; Za pranje pipeta treba koristiti samo 0,9% rastvor natrijum hlorida;
• d) netačno evidentiranje krvi koja se testira;
• e) nepoštovanje potrebnog vremena za reakciju aglutinacije; u slučaju žurbe, kada se reakcija uzme u obzir prije isteka 5 minuta, aglutinacija možda neće nastupiti ako u krvi koja se ispituje postoje slabi aglutinogeni; ako je reakcija preeksponirana duže od 5 minuta, kapljice se mogu osušiti s rubova, simulirajući aglutinaciju, što će također dovesti do pogrešnog zaključka;
• f) odsustvo aglutinacije zbog visoke (iznad 25°C) temperature okoline. Da biste izbjegli ovu grešku, preporučljivo je koristiti posebno pripremljene serume za rad u vrućim klimama; određivanje krvnih grupa vrši na tanjiru ili plastičnom poslužavniku čija je vanjska površina dna uronjena u hladnu vodu.
• g) nepravilno centrifugiranje: nedovoljno centrifugiranje može dovesti do lažno negativnog rezultata, a pretjerano centrifugiranje može dovesti do lažno pozitivnog rezultata.

Greške u zavisnosti od upotrebe inferiornih standardnih seruma i standardnih eritrocita:

• a) slabi standardni serumi sa titrom manjim od 1:32 ili istekli mogu uzrokovati kasnu i slabu aglutinaciju;
• b) upotreba neodgovarajućih standardnih seruma ili eritrocita koji su pripremljeni nesterilno i nedovoljno očuvani dovodi do pojave nespecifične “bakterijske” aglutinacije.

Greške u zavisnosti od bioloških karakteristika krvi koja se testira:

Greške u zavisnosti od bioloških karakteristika crvenih krvnih zrnaca koje se proučavaju:

• a) kasna i slaba aglutinacija se objašnjava „slabim” oblicima antigena, eritrocita, a češće prisustvom slabog aglutinogena A 2 u grupama A i AB. Istovremeno, u slučaju određivanja krvne grupe bez testiranja seruma na prisustvo aglutinina (jednostavna reakcija) može doći do grešaka, usled kojih se krv grupe A 2 B definiše kao grupa B (III) , a krv A 2 - kao grupa 0 (I). Stoga, kako bi se izbjegle greške, određivanje krvne grupe i davaoca i primatelja mora se vršiti pomoću standardnih crvenih krvnih zrnaca (dvostruka ili unakrsna reakcija). Da bi se identifikovao aglutinogen A 2, preporučuje se ponavljanje studije sa drugim vrstama (serijama) reagensa, korišćenjem drugog laboratorijskog staklenog posuđa, povećavajući vreme registracije reakcije.

  Specifični reagensi za razjašnjavanje krvne grupe u prisustvu slabih varijanti A antigena (A 1, A 2, A 3) pomoću reakcije direktne aglutinacije su anti-A cl zolikon i anti-A reagens).

• b) “panaglutinacija” ili “autoaglutinacija”, odnosno sposobnost krvi da daje istu nespecifičnu aglutinaciju sa svim serumima, pa čak i sa svojim. Intenzitet takve reakcije slabi nakon 5 minuta, dok se prava aglutinacija povećava. Najčešće se nalazi kod hematoloških, onkoloških bolesnika, opečenih i dr. Za kontrolu se preporučuje da se procijeni da li dolazi do aglutinacije ispitivanih eritrocita u standardnom serumu grupe AB (IV) i fiziološkom rastvoru.

  Krvna grupa tokom “panaglutinacije” može se odrediti nakon tri puta ispiranja crvenih krvnih zrnaca. Da bi se uklonila nespecifična aglutinacija, tableta se stavlja u termostat na temperaturi od +37°C na 5 minuta, nakon čega nespecifična aglutinacija nestaje, ali ostaje prava. Preporučljivo je ponoviti određivanje pomoću monoklonskih antitijela i Coombs testa.

  U slučaju da pranje crvenih krvnih zrnaca ne daje željeni rezultat, potrebno je ponovo uzeti uzorak krvi u prethodno zagrijanu epruvetu, staviti uzorak u termo posudu da održava temperaturu od +37°C. i dostaviti u laboratoriju na analizu. Određivanje krvne grupe mora se vršiti na temperaturi od +37°C, za šta se koriste prethodno zagrijani reagensi, fiziološki rastvor i tableta.

• c) crvena krvna zrnca ispitivane krvi formiraju „stupci novčića“, koji se prilikom makroskopskog pregleda mogu zamijeniti za aglutinate. Dodavanje 1-2 kapi izotonične otopine natrijum hlorida praćeno blagim ljuljanjem tablete po pravilu uništava „stupove novčića“.
• d) mješovita ili nepotpuna aglutinacija: neka od crvenih krvnih zrnaca aglutiniraju, a neka ostaju slobodna. Uočava se kod pacijenata grupa A(II), B(III) i AB(IV) nakon transplantacije koštane srži ili tokom prva tri mjeseca nakon transfuzije krvi grupe 0(I). Heterogenost eritrocita periferne krvi jasno je potvrđena DiaMed gel testom.

Greške u zavisnosti od bioloških karakteristika seruma koji se testira:

• a) otkrivanje antitela različite specifičnosti tokom rutinskog testiranja je rezultat prethodne senzibilizacije. Preporučljivo je utvrditi specifičnost antitijela i odabrati tipizirana crvena krvna zrnca bez antigena na koji je otkrivena imunizacija. Od imuniziranog primatelja se traži da pojedinačno odabere kompatibilnu krv davaoca;
• b) ako se u prisustvu test seruma otkrije formiranje „novčića“ standardnih eritrocita, preporučljivo je potvrditi abnormalni rezultat pomoću standardnih eritrocita grupe 0 (I). Da biste razlikovali "stupci novčića" i prave aglutinate, dodajte 1-2 kapi izotonične otopine natrijum hlorida i protresite tabletu, dok se "stupci novčića" uništavaju;
• c) odsustvo anti-A ili anti-B antitela. Moguće kod novorođenčadi i pacijenata sa potisnutim humoralnim imunitetom;
ukupno stranica: 10

LITERATURA [prikaži] .

1. Imunološka selekcija donora i primaoca za transfuziju krvi, njenih komponenti i transplantaciju koštane srži / Kom. Shabalin V.N., Serova L.D., Bushmarina T.D. i drugi - Lenjingrad, 1979. - 29 str.
2. Kaleko S. P., Serebryannaya N. B., Ignatovich G. P. i dr. Alosenzitizacija tokom terapije hemokomponentama i optimizacija selekcije histokompatibilnih parova donor-primalac u vojnim medicinskim ustanovama / Metodologija. preporuke - Sankt Peterburg, 1994. - 16 str.
3. Praktična transfuziologija / Ed. Kozinets G.I., Biryukova L.S., Gorbunova N.A. i drugi - Moskva: Triada-T, 1996. - 435 str.
4. Vodič za vojnu transfuziologiju / Ed. E. A. Nechaev. - Moskva, 1991. - 280 str.
5. Vodič za transfuzijsku medicinu / Ed. E. P. Svedentsova. - Kirov, 1999.- 716 str.
6. Rumjancev A. G., Agranenko V. A. Klinička transfuziologija - M.: GEOTAR MEDICINA, 1997. - 575 str.
7. Shevchenko Yu.L., Zhiburt E.B., Sigurna transfuzija krvi: Vodič za doktore - Sankt Peterburg: Peter, 2000. - 320 str.
8. Shevchenko Yu.L., Zhiburt E.B., Serebryannaya N.B. Imunološka i infektivna sigurnost hemokomponentne terapije - Sankt Peterburg: Nauka, 1998. - 232 str.
9. Shiffman F.J. Patofiziologija krvi / Transl. s engleskog - M. - Sankt Peterburg: Izdavačka kuća BINOM - Nevski dijalekt, 2000. - 448 str.
10. Transfuzija krvi u kliničkoj medicini / Ed. P.L.Mollison, C.P. Engelfriet, M. Contreras.- Oxford, 1988.- 1233 str.

Izvor: Medicinska laboratorijska dijagnostika, programi i algoritmi. Ed. prof. Karpishchenko A.I., Sankt Peterburg, Intermedica, 2001

Sigurno se svako barem jednom u životu susreo sa testom krvne grupe. Tema današnjeg članka je o tome koje metode postoje za određivanje krvne grupe i koje je od njih najbolje testirati na pripadnost određenoj vrsti.

Zašto se rade testovi krvnih grupa?

U modernoj hematologiji krvna grupa se podrazumijeva kao specifičan skup antigena koji se nalazi na površini crvenih krvnih stanica, što određuje njihovu specifičnost. Postoji ogroman broj ovih antigena (obično se koristi tabela grupa sa svim vrstama antigena), međutim, klasifikacija krvi prema ABO sistemu i Rh faktoru je priznata u cijelom svijetu.

Krvna grupa se mora odrediti u pripremi za bilo kakve operacije. Obavezni kontingenti u kojima se vrši određivanje krvne grupe su vojska, policajci i službenici unutrašnjih poslova. Ova mjera je neophodna, jer u slučaju razvoja urgentnog stanja (opasnog po život) može doći do potrebe za transfuzijom kada nema vremena za analizu i testiranje na njenu kompatibilnost s transfuzijom.

Određivanje krvnih grupa standardnim metodama

Postoji mnogo različitih tehnika, ali se standardna tehnika seruma najčešće koristi u kliničkim laboratorijama. Kako odrediti krvnu grupu standardnim serumom?

Ova metoda se koristi za određivanje antigena AB0 sistema. Standardni izohemaglutinirajući serum sadrži skup specifičnih antitijela na površinske molekule crvenih krvnih stanica. U prisustvu antigena, koji je podložan djelovanju antitijela, dolazi do stvaranja kompleksa antigen-antitijelo, što izaziva pokretanje kaskade imunoloških reakcija. Njegov rezultat je aglutinacija crvenih krvnih zrnaca, a na osnovu prirode aglutinacije može se donijeti zaključak o klasificiranju uzorka u određenu krvnu grupu.

Standardni serumi se pripremaju od donorske krvi po određenom sistemu - izolacijom plazme sa prisutnim antitelima i njenim naknadnim razblaživanjem. Razrjeđivanje se provodi korištenjem izotonične otopine natrijum hlorida.

Razblaživanje se vrši na sledeći način: u epruvetu se dodaje 1 ml plazme sa 1 ml 0,9-postotnog rastvora kuhinjske soli i dobro promeša rastvor. Nakon toga, 1 ml dobivene otopine plazme uzima se pipetom i dodaje u drugu epruvetu koja sadrži izotonični rastvor. Tako se postiže razblaživanje plazme od 1:256. Upotreba drugih razrjeđenja može dovesti do dijagnostičkih grešaka.

Tehnika istraživanja je sljedeća - na posebnu ploču za određivanje krvne grupe stavlja se jedna kap (ukupne zapremine od oko 0,1 ml) svakog seruma u područje sa odgovarajućom oznakom (koriste se serumi iz dva uzorka, od kojih je jedan je kontrola, a drugi se koristi za studiju). Nakon toga se ispitni uzorak (0,01 ml) stavlja blizu svake kapi seruma, nakon čega se posebno miješa sa svakom vrstom dijagnostikuma.

Nakon nekog vremena (u prosjeku oko 5 minuta), rezultati se analiziraju s opisom prirode reakcije koja se dogodila:

• ako dođe do aglutinacije u uzorku za testiranje, test je pozitivan;
• ako nema aglutinacije, onda je reakcija negativna.

Najjednostavnije rečeno, prisustvo aglutinacije ukazuje na to da krv sadrži potreban skup aglutinogena, a ako do nje dođe, onda krv pripada grupi za koju se antitijela nalaze u serumu. Na osnovu dobijenih rezultata izrađuje se tabela ili dijagram koji vizuelno prikazuje rezultate.

Metoda unakrsne reakcije

Ova tehnika se sastoji od određivanja aglutinogena pomoću koliklona ili standardnih seruma uz paralelnu detekciju aglutinina pomoću standardnih eritrocita.

Metodologija se praktički ne razlikuje od određivanja krvne grupe pomoću seruma, međutim, postoje neki dodaci.

Jedna mala kap standardnih crvenih krvnih zrnaca dodaje se na ploču ispod nanesenog seruma. Nakon toga se iz epruvete u kojoj se nalazi krv pacijenta koja je prošla kroz centrifugu pomoću pipete izdvaja plazma, koja se dodaje standardnim crvenim krvnim zrncima, a crvena krvna zrnca na dnu se dodaju standardnom serumu.

Kao i kod standardne serumske metode, dobijeni rezultati se procjenjuju nekoliko minuta nakon početka reakcije. U prisustvu aglutinacije u standardnim serumima procjenjuje se prisustvo aglutinina AB0 sistema, a u razvoju reakcije plazme sa standardnim eritrocitima o prisustvu aglutinogena.

Crossover metoda je postala široko rasprostranjena zbog činjenice da sprječava velike dijagnostičke greške pri određivanju krvi standardnim metodama.

Definicija grupe pomoću zoliklona

Primjena koliklona se pribjegava kada je nemoguće odrediti antigene AB0 sistema standardnim serumima.

Cilikloni su specifična antitijela dobivena njihovom hibridizacijom u živom organizmu (obično se koriste tsolikloni dobiveni od miševa modifikacijom B limfocita). Njihova karakteristična karakteristika je razvoj imunološke reakcije između koliklona i antigena A ili B koji se nalazi na površini membrane eritrocita.

Algoritam za korištenje monoklonskih antitijela je sljedeći: jedna velika kap otopine tsoliklona se nanese na tabletu (potrebno je označiti gdje i koji se tsolikloni nalaze). Nakon toga, jedna kap test krvi se dodaje u serum i rezultati se procjenjuju nakon nekoliko minuta.

Ispitivanje se mora obaviti u posebno stvorenim uslovima u skladu sa temperaturom i vlažnošću (prije sprovođenja ove analize morate se uvjeriti u prikladnost zoliklona).

Test se smatra pozitivnim ako je u uzorku za testiranje došlo do aglutinacije crvenih krvnih zrnaca (tj. ako je došlo do reakcije između antitijela i antigena). Ako se uoči pozitivan rezultat u dvije kapi, uzorak se procjenjuje da pripada grupi IV. Ako se, naprotiv, reakcija nije dogodila ni u jednom uzorku, onda je krvna grupa vjerovatno I. Greške u određivanju krvi ovom metodom su rijetke.

Ekspresna metoda “Erythrotest”

Unatoč činjenici da su općeprihvaćene metode za određivanje krvne grupe široko rasprostranjene, ekspresne metode za određivanje krvne grupe trenutno se široko uvode u medicinsku i laboratorijsku praksu. Jedan od njih je "Erythrotest".

Komplet za određivanje krvne grupe "Erythrotest-Groupcard" sastoji se od sljedećih komponenti:

• univerzalna tableta sa pet rupa za određivanje grupe po sistemu AB0 i njenoj Rh pripadnosti;
• Scarifier za dobivanje uzorka za istraživanje;
• čista pipeta s kojom se provodi set otopina;
• staklene šipke koje se koriste za miješanje uzoraka.

Sva navedena oprema neophodna je za ispravnu ekspresnu dijagnostiku.

Ova tehnika vam omogućava da odredite svoju krvnu grupu i Rh faktor u bilo kojem stanju, posebno ako nije moguće koristiti klasične metode.

Proces analize metodom Erythrotest

Jažice tablete sadrže tsoliklone za površinske antigene (tsoliklon anti-A, anti-B, anti-AB), kao i za glavni antigen koji određuje nasljeđivanje Rh faktora (tsoliklon anti-D). Peta jažica sadrži kontrolni reagens, koji vam omogućava da spriječite greške i pravilno izvršite analizu za grupnu pripadnost.

Za procjenu dobivenih rezultata koristi se posebna tabela u kojoj su navedeni svi mogući rezultati istraživanja.

Indikacije: potreba za transfuzijom krvi, priprema za operaciju.

pripremiti: standardna ploča sa udubljenjima; set staklenih štapića; izotonični rastvor natrijum hlorida; set hemaglutinirajućih seruma grupa 1,2,3,4 od dve serije; pipete; test krvi uzet iz vene ili prsta; sat; Rukavice; Spremnici za otpadni materijal; posude sa dezinfekcionim rastvorima.

Priprema za manipulaciju:

1. Medicinska sestra je potpuno spremna za izvođenje zahvata: obučena u odijelo (haljinu), masku, rukavice, kapu i zamjensku obuću.
2. Provjera kvaliteta standardnih hemaglutinirajućih seruma: označavanje boje, izgled (svijetlo, prozirno); sigurnost pakovanja, prisustvo ispravno dizajnirane etikete.
3. Pripremite sve što je potrebno za obavljanje manipulacije.

Izvođenje manipulacije:

Na bijelu ploču, prema oznaci, uzastopno nanesite jednu kap seruma iz grupa 1, 2, 3 od dvije serije. Svaku pipetu odmah spustite u istu ampulu (bočicu) iz koje je uzeta;

Uz pomoć staklenog štapića nanesite kap krvi koja se ispituje pored udubljenja (6 udubljenja). Kap krvi treba da bude 10 puta manja od kapi seruma;

zabilježite vrijeme i pomiješajte krv sa serumom od 1 g čistom, suhom staklenom šipkom, a zatim drugim štapićem od 2 g. itd. u svim udubljenjima;

kako dođe do aglutinacije, ali ne ranije od 3 minute, dodajte jednu kap izotonične otopine natrijum hlorida onim kapima u kojima je došlo do reakcije aglutinacije da biste isključili lažnu aglutinaciju i nastavite sa posmatranjem 5 minuta.

Evaluacija rezultata:

a) uz pozitivnu reakciju, u smjesi se pojavljuju sitna zrnca vidljiva oku, koja se sastoje od slijepljenih crvenih krvnih zrnaca. Sitna zrna se spajaju u krupna zrna, a ponekad i u pahuljice, a surutka postaje bezbojna;

b) sa negativnom reakcijom tečnost ostaje jednolično ružičasto obojena;

c) moguće su 4 kombinacije pozitivnih i negativnih reakcija:

1. ako nema aglutinacije ni u jednoj od ćelija, onda je krv I grupa (0).

2. ako postoji aglutinacija u prvoj i trećoj ćeliji, onda je krv II grupa (A).

3. ako je aglutinacija u prvoj i drugoj grupi, onda je krv grupa III (B).

4. ako je aglutinacija u prvoj, drugoj, trećoj ćeliji, onda je krv grupa IV (AB).

Da bi se isključile greške, krv se ispituje serumom grupe 4, gdje ne bi trebalo biti aglutinacije.

Kraj manipulacije:

1. Skinite rukavice i stavite ih u rastvor za dezinfekciju.
2. Operite ruke i osušite ih ručnikom.

Bilješka: Određivanje krvne grupe vrši se u prostoriji s dobrim osvjetljenjem na temperaturi od 15 - 25 0C.

Određivanje krvne grupe u ABO sistemu

Da bi se spriječile komplikacije tijekom transfuzije krvi zbog reakcije aglutinacije, potrebno je prvo odrediti krvnu grupu osobe.

Svrha rada: Određivanje krvnih grupa u ABO sistemu (pomoću ciklona).

Oprema: zolikloni, sterilni skarifikator, dve staklene šipke, standardni serumi grupe I, II, III; bijele pločice, vata, alkohol, jod, etar. Predmet istraživanja je osoba.

Izvođenje radova. Krvne grupe su određene osobinama crvenih krvnih zrnaca, koje se određuju pomoću standardnih seruma koji sadrže poznate aglutinine (antitijela).

Nanesite na pločicu, bez mešanja, jednu kap standardnih seruma grupe I, II i III, koji sadrže sledeće aglutinine, redom: I-α i β, II-β i III - α. Zatim, nakon što je primila kap krvi iz prsta, mala količina nje se prebacuje sa prvim staklenim štapićem u kap seruma grupe I, a drugim čistim krajem iste štapiće ista količina krvi se prenosi u serum II grupe. Pomoću drugog staklenog štapića, treća kap krvi koja se testira se prenosi u serum III grupe. Svaki put se krv dobro promeša u kapi seruma dok smesa ne postane jednolično ružičasta. Reakcija aglutinacije se javlja u roku od 1-5 minuta. U prisustvu aglutinacije, kap gubi svoju homogenost i postaje prozirna, a crvena krvna zrnca se spajaju u obliku grudica. Krvna grupa se određuje ovisno o prisutnosti ili odsustvu aglutinacije.

1. Ako nema aglutinacije u sve tri kapi, to ukazuje na odsustvo aglutinogena u crvenim krvnim zrncima krvi koja se ispituje i stoga pripada grupi I (0).

2. Ako je do aglutinacije došlo sa serumima grupe I i III, koji sadrže aglutinine α + β, odnosno α, tada crvena krvna zrnca krvi koja se testira sadrže aglutinogen A i ova krv pripada grupi II (A).

3. Ako je do aglutinacije došlo sa serumima grupe I i II koji sadrže aglutinine α + β i β, onda eritrociti krvi koja se testira sadrže aglutinogen B i pripada grupi III (B).

4. Ako je došlo do aglutinacije sa serumima grupe I, II i III, koji sadrže α + β, β i α aglutinine, tada eritrociti krvi koja se testira sadrže i aglutinogen A i aglutinogen B. Shodno tome, krv koja se testira pripada grupa IV (AB).

Nedavno se određivanje ljudskih krvnih grupa ABO sistema vrši pomoću anti-A i Anti-B zoliklona (monoklonska antitela Anti-A i Anti-B), koji se koriste ili umesto ili paralelno sa poliklonskim imunim serumima. Monoklonalna anti-A i anti-B antitela proizvode dva mišja hibridoma i pripadaju imunoglobulinima klase M. Kolikloni se prave od ascitesne tečnosti miševa koji nose anti-A i anti-B hibridome. Tehnologija proizvodnje reagensa eliminira mogućnost njegove kontaminacije virusima koji su patogeni za ljude.

Tabela 1. Procjena rezultata određivanja krvnih grupa primjenom zoliklona

Izvođenje radova. Nanesite jednu veliku kap zoliklona Anti-A i Anti-B na ploču pomoću pojedinačnih pipeta. Stavite jednu malu kap krvi koja se testira pored kapi antitijela. Vizualno posmatrajte napredak reakcije sa zoliklonima laganim trešenjem ploče 3 minute. Aglutinacija eritrocita sa koliklonima obično se javlja u prvih 3-5 sekundi, ali posmatranje treba provoditi 3 minute zbog kasnije pojave aglutinacije sa eritrocitima koji sadrže slabe varijante antigena A ili B. Pozitivan rezultat se izražava u aglutinaciji eritrociti. U slučaju negativne reakcije, kap ostaje jednolično obojena crvenom bojom.

Znak plus (+) označava prisustvo aglutinacije, znak minus (-) označava odsustvo aglutinacije.

Sastavljanje protokola. Napišite kojoj krvnoj grupi pripada vaša krv. Odredite: primaocima koje krvne grupe se mogu transfuzirati s vašom krvlju i koja krvna grupa može biti transfuzirana vama?

Situacioni zadaci za utvrđivanje konačnog nivoa znanja učenika:

Zadatak br. 1

Kod dugotrajnog gladovanja ljudi razvijaju takozvani edem gladi. Šta je razlog?

Zadatak br. 2

Čovjek je jeo hranu lošeg kvaliteta. Nakon nekog vremena otkriva se povećanje viskoznosti u krvi. Kako se ovo može objasniti?

Zadatak br. 3

Test krvi je pokazao da 80% hemoglobina čini fetalni hemoglobin. Kome pripada krv?

Zadatak br. 4

Kada su prebrojani, bilo je 580 crvenih krvnih zrnaca u velikim kvadratima Gorjajevljeve komore. Koliko ih ima u 1 ml krvi, ako je krv uvučena u melanžer do oznake 0,5?

Problem #5

Bilo je 100 leukocita u 25 velikih kvadrata Gorjajevske komore. Koliko ih se nalazi u 1 mm3 krvi, ako je uvučena u melangeur do oznake 0,5?

Problem #6

1 mm3 krvi sadrži 6 miliona. crvena krvna zrnca Koliko ih ima u cirkulirajućoj krvi ako se 20% sve krvi nalazi u depou krvi? Uzmite tjelesnu težinu od 80 kg.

Problem br. 7

Kao rezultat transfuzije nekompatibilne krvne grupe, crvena krvna zrnca će se zalijepiti, što će potom dovesti do hemolize. Koji je tip hemolize?

Problem br. 8

Zašto je ženama zabranjeno da rade u industrijama sa visokim nivoom vibracija, da voze teška vozila itd.?

Problem br. 9

Koji je razlog povećanja bilirubina u krvi pri trovanju octenom kiselinom?

Problem br. 10

Očeva krv je Rh-pozitivna, majčina krv Rh-negativna, prva trudnoća. Postoji li opasnost od Rh konflikta između majke i fetusa ako fetus ima Rh pozitivnu krv?

Problem br. 11

Otac ima Rh-negativnu krv, majka Rh-pozitivnu krv. Fetus nema Rh faktor. Postoji li opasnost od Rh konflikta između fetusa i majke?

Problem br. 12

Zašto infarkt miokarda može nastati tokom akutnog mentalnog stresa?

Problem br. 13

Koagulacija krvi je složen višekomponentni "kaskadni" enzimski proces. Normalan tok svake prethodne faze osigurava razvoj i završetak svake naredne. Šta se dešava u prvoj, drugoj i trećoj fazi koagulacione hemostaze? Šta uključuje postfaza hemokoagulacije?

Problem br. 14

Za normalan tok zgrušavanja krvi neophodan je niz faktora: protrombin, tromboplastin, AC - globulin, jonizovani kalcijum, prokonvertin itd. Navedite faktor čije je učešće neophodno za nastanak svih faza hemokoagulacije. Koji faktor osigurava konverziju polimera rastvorljivog fibrina u nerastvorljivi fibrin? Gdje nastaje protrombin? Koji faktori su uključeni u formiranje plazma i tkivnih protrombinaza?

23. Određivanje krvne grupe.

19. Klasifikacija hronične ishemije prema Fontaine-Leriche-Pokrovsky

Klasifikacija Fontaine-Leriche-Pokrovsky temelji se na identifikaciji nekoliko faza u razvoju kronične arterijske insuficijencije (CAI) ili insuficijencije arterijske cirkulacije donjih ekstremiteta: I stadij - asimptomatska aterosklerotska lezija arterija, otkrivena samo instrumentalnim pregledom . II stadijum - arterijska insuficijencija koja se javlja tokom funkcionalnog opterećenja (LO). Faza IIA - PC na velike udaljenosti (> 200 m). Stage NB - PC na kratkoj udaljenosti (< 200 м). Стадия III - артериальная недостаточность в покое (ишемия покоя). Стадия IV - трофические нарушения, некроз тканей. Важную роль сыграло выделение такого понятия, как критическая ишемия конечности (КИК), которое объединяет больных сХАНШиГУстадий [Дедов И. И. и др., 1998]. Смысл выделения этой группы больных заключается в том, что без своевременного восстановления кровотока ишемия практически неизбежно приведет у них к обширному некрозу тканей и ампутации. Согласно определению КИК от 1997 г., этот диагноз ставят при наличии одного из проявлений: 1. Ишемическая боль покоя в сочетании с АД < 40 мм рт. ст. на тибиальной артерии в положении лежа, на артерии большого пальца стопы - менее 30 мм рт. ст., отсутствием пульсовой волны или ее сглаженность при УЗДГ. 2. Некроз тканей (язва или гангрена) на фоне диффузной ишемии стопы в сочетании с АД < 60 мм рт. ст. на тибиаль ной артерии в положении лежа, на артерии большого пальца стопы - менее 40 мм рт. ст3., отсутствием пульсовой волны или ее сглаженностью при УЗДГ.

22.Transplantacija- operacija zamjene pacijentovog organa ili tkiva odgovarajućim strukturama uklonjenim iz drugog tijela.

Transplantacija se sastoji od dvije faze: uzimanja organa iz tijela donora i implantacije u tijelo primatelja. Transplantacija organa i (ili) tkiva može se izvršiti samo u slučajevima kada druga medicinska sredstva ne mogu jamčiti očuvanje života primatelja ili obnovu njegovog zdravlja. Objekti transplantacije mogu biti srce, bubrezi, pluća, jetra, koštana srž i drugi organi; njihovu listu odobrava Ministarstvo zdravlja. Prilikom transplantacije organa optimalno je uskladiti krvnu grupu davaoca i primaoca po sistemu AB0. Odstupanje u sistemu AB0 je također prihvatljivo, ali prema sljedećim pravilima (koja podsjeća na Otenbergovo pravilo za transfuziju krvi):

Ako primalac ima krvnu grupu 0(I), transplantacija je moguća samo od donora sa grupom 0(I);

Ako primalac ima krvnu grupu A(II), transplantacija je moguća samo od donora sa tipom A(II);

Ako primalac ima krvnu grupu B(III), moguća je transplantacija od donora sa grupama 0(I) i B(III);

Ako primalac ima krvnu grupu AB(IV), moguća je transplantacija od donora sa grupama A(II), B(III) i AB(IV).

Rh kompatibilnost između davaoca i primaoca uzima se u obzir pojedinačno za transplantaciju srca i srčano-plućnog kompleksa pri izvođenju umjetne cirkulacije i primjeni transfuzije krvi.

Osnove imunosupresije

Kako bi se smanjila aktivnost imunološkog sistema i spriječilo odbacivanje organa nakon transplantacijskih operacija, svi pacijenti se podvrgavaju farmakološkoj imunosupresiji. U nekompliciranim slučajevima primjenjuju se relativno male doze lijekova prema posebnim režimima. S razvojem krize odbacivanja, doza imunosupresiva se značajno povećava i njihova kombinacija se mijenja. Treba imati na umu da imunosupresija dovodi do značajnog povećanja rizika od infektivnih postoperativnih komplikacija. Stoga se moraju posebno pažljivo pridržavati aseptičkih mjera opreza u odjelima za transplantaciju.

Sljedeći lijekovi se uglavnom koriste za imunosupresiju.

Ciklosporin- ciklični polipeptidni antibiotik gljivičnog porijekla. Potiskuje transkripciju gena za interleukin-2, neophodnog za proliferaciju T-limfocita, i blokira T-interferon. Općenito, imunosupresivni učinak je selektivan. Upotreba ciklosporina osigurava dobro preživljavanje transplantata uz relativno nisku vjerovatnoću zaraznih komplikacija.

Negativni učinak primjene lijeka je nefrotoksičnost, ali njegova pozitivna svojstva omogućuju korištenje ciklosporina kao glavnog imunosupresiva u transplantaciji bubrega.

Sirolimus- makrolidni antibiotik, strukturno srodan takrolimusu. Potiskuje regulatornu kinazu (“meta sirolimusa”) i smanjuje ćelijsku proliferaciju u ciklusu ćelijske diobe. Djeluje na hematopoetske i nehematopoetske stanice. Koristi se u osnovnoj imunosupresiji kao glavna ili dodatna komponenta. Nema potrebe stalno pratiti koncentraciju lijeka u krvi. Moguće komplikacije lijeka: hiperlipidemija, trombotička mikroangiopatija, anemija, leukopenija, trombocitopenija.

Azatioprin. U jetri se pretvara u merkaptopurin, koji inhibira sintezu nukleinskih kiselina i diobu stanica. Koristi se u kombinaciji s drugim lijekovima za liječenje kriza odbacivanja. Mogu se razviti leuko- i trombocitopenija.

Prednizolon. Steroidni hormon koji ima snažan nespecifični depresivni učinak na ćelijski i humoralni imunitet. Ne koristi se u svom čistom obliku, dio je imunosupresivnih režima. U visokim dozama koristi se za krize odbacivanja.

Orthoclone. Sadrži antitela na CD3+ limfocite. Koristi se za liječenje kriza odbacivanja u kombinaciji s drugim lijekovima.

Antilimfocitni globulin i antilimfocitni serumi. Uvedeni su u kliničku praksu 1967. godine kako bi spriječili odbacivanje kod pacijenata sa alotransplantacijom bubrega. Sada se široko koristi za prevenciju i liječenje odbacivanja, posebno kod pacijenata sa odbacivanjem otpornim na steroide. Imaju imunosupresivni učinak zbog inhibicije T-limfocita.

Pored navedenih lijekova koriste se i drugi agensi: inhibitori kalcineurina, monoklonska i poliklonska antitijela, humanizirana anti-TAC antitijela itd.

Histokompatibilnost- kompatibilnost organa i tkiva, na primjer, tokom transplantacije tijelo primatelja ne odbacuje kompatibilno tkivo. Određuje se specifičnim antigenskim kompleksima HLA sistema ćelija koji se nalaze na membrani.

Histokompatibilnost igra ključnu ulogu u uspjehu transplantacije organa i tkiva. Normalno, tijelo se opire uvođenju stranog proteina u sebe, reagirajući na njega imunološkom agresijom. Za uspješnu transplantaciju organa potrebno je najpreciznije podudaranje davaoca i primaoca u antigenskoj strukturi receptora. Ovisno o organu, testiraju se različiti antigeni kako bi se utvrdila kompatibilnost.

Najjednostavniji primjer određivanja histokompatibilnosti je određivanje krvnih grupa i Rh faktora prije transfuzije. Što više specifičnih antigena ima u transplantiranom organu ili tkivu, to je teže odabrati odgovarajućeg donora.

HLA kompatibilnost

Kompatibilnost HLA antigena se smatra odlučujućom prilikom odabira donora. Kompleks gena koji kontrolišu sintezu glavnih antigena histokompatibilnosti nalazi se na hromozomu VI. Polimorfizam HLA antigena je veoma širok. U transplantologiji su od primarnog značaja lokusi A, B i DR.

Trenutno su identifikovana 24 alela HLA-A lokusa, 52 alela HLA-B lokusa i 20 alela HLA-DR lokusa. Kombinacije gena mogu biti izuzetno raznolike, a podudaranje na sva tri ova lokusa u isto vrijeme gotovo je nemoguće.

Nakon određivanja genotipa (tipizacije), unosi se odgovarajući unos, na primjer, „HLA-A 5 (antigen je kodiran 5 sublokusom A VI hromozoma), A 10, B 12, B 35, DR w6, ” itd.

Odbacivanje u ranom postoperativnom periodu obično je povezano sa HLA-DR nekompatibilnošću, a dugoročno - sa HLA-A i HLA-B. Sa potpunim podudaranjem HLA-A i HLA-B, vjerovatnoća presađivanja bubrega donatora, na primjer, u roku od 2 godine je oko 90%, sa polovičnim podudaranjem - 65-85%.

.Fazije zacjeljivanja rana.

Proces rane odvija se određenim redoslijedom i ima tri faze:

Faza I - faza upale (1-5 dana);

II faza - faza regeneracije (6-14. dan);

Faza III - faza ožiljaka i epitelizacije (od 15 dana do 6 mjeseci).

Inflamatorna faza ima dva perioda: vaskularne promjene i čišćenje rane od nekrotičnog tkiva.

Period vaskularnih promjena - kao posljedica oštećenja krvnih žila i složenih biohemijskih procesa u oštećenom području dolazi do poremećaja mikrocirkulacije, dolazi do eksudacije plazme i limfe, a formirani elementi (leukociti, limfociti, makrofagi) izlaze iz vaskularnog korita. Nastaje edem, dolazi do infiltracije leukocita u tkiva, odnosno stvaraju se uslovi za čišćenje rane.

Period čišćenja rane od nekrotičnog tkiva je nekroliza. U tkivima koji okružuju ranu pojavljuju se formirani elementi koji fagocitiziraju nekrotične mase, luče proteolitičke enzime i uklanjaju toksine, produkte razgradnje proteina i mikrobe iz rane uz upalni eksudat. Kao rezultat, rana se čisti od nekrotičnog tkiva, ublažavaju se simptomi upale i počinje sljedeća faza procesa rane.

Faza regeneracije počinje 6. dana nakon ozljede i karakterizira ga razvoj restorativnih regenerativnih procesa. U rani dolazi do intenzivnog rasta novih krvnih i limfnih žila, poboljšava se cirkulacija krvi, smanjuje se hipoksija, a postupno, do 14. dana, upalna reakcija jenjava. U rani se formiraju nove žile, sazrijeva granulacijsko tkivo, što pomaže u otklanjanju defekta tkiva.

Određivanje krvne grupe po sistemu AB0 (standardna metoda).

1. Studija se izvodi korištenjem dvije serije standardnih hemaglutinirajućih seruma (I serum - bezbojna etiketa, II - plava, III - crvena, IV - svijetlo žuta) na porcelanskoj ploči ili pločici s potpisom (ime pacijenta).

2. Odnos ispitivanog volumena krvi i seruma treba da bude 1:10.

3. Studija se može izvesti na temperaturama vazduha od 15 do 250C.

4. Ploča se lagano ljulja. Kako dođe do aglutinacije, ali ne prije nego nakon 3 minute, dodajte jednu kap izotonične otopine natrijum hlorida u kapi. Rezultat se očitava nakon 5 minuta:

1) Krvna grupa I - nema aglutinacije ni u jednoj kapi;

2) grupa II - standardni serumi grupe I i III aglutiniraju eritrocite, ali sa serumom II grupe ne dolazi do aglutinacije;

3) Grupa III - standardni serumi grupe I i II daju pozitivnu reakciju, a serum grupe III daje negativnu reakciju;

4) Grupa IV - standardni serumi sve tri grupe izazivaju aglutinaciju. Međutim, za konačni zaključak potrebno je provesti kontrolnu studiju o specifičnosti reakcije sa standardnim hemaglutinirajućim serumom IV grupe.

Određivanje krvne grupe ABO sistemom (ekspres metoda).

1. Studija se provodi sa dva monoklonska seruma: anti-A (ružičasti) i anti-B (tirkizni).

2. Reakcija se izvodi na porculanskoj ploči na normalnoj temperaturi.

3. Posmatrajte dok se ljuljate 3 minute.

Rezultat glasi kako slijedi:

1) nema aglutinacije sa anti-A serumom, ali sa anti-B serumom postoji aglutinacija - test krvi B (III);

2) došlo je do aglutinacije u kapi sa anti-A serumom, ali ne i sa anti-B serumom - test krv A (II);

3) došlo je do aglutinacije sa oba seruma - test krv AB (IV);

4) kod obe kapi nije došlo do aglutinacije - krv 0 (I);

Komplikacije transfuzije krvi karakteriziraju teži klinički simptomi i mogu dovesti do smrti pacijenta. Najčešći uzrok komplikacija je transfuzija nekompatibilne krvi (različite grupe ili Rh nekompatibilne). Rjeđe se komplikacije uočavaju od transfuzije nekvalitetne krvi (pregrijane, kontaminirane bakterijama, nepravilno pohranjene itd.), od pogrešaka u tehnici (unošenje zraka, krvnih ugrušaka u krvotok itd.) i zanemarivanja kontraindikacija za transfuziju krvi.

Komplikacije se izražavaju u vidu akutnog zatajenja srca, plućnog i cerebralnog edema. Vrijeme nastanka transfuzijskih komplikacija varira i u velikoj mjeri ovisi o njihovim uzrocima. Dakle, kod zračne embolije može doći do katastrofe odmah nakon što zrak uđe u krvotok. Naprotiv, komplikacije povezane sa zatajenjem srca razvijaju se na kraju ili ubrzo nakon transfuzije velikih doza krvi i plazme. Komplikacije transfuzije nekompatibilne krvi nastaju brzo, često nakon davanja male količine te krvi, rjeđe se katastrofa događa u bliskoj budućnosti nakon završetka transfuzije. Tok posttransfuzijskih komplikacija može se podijeliti u 4 perioda: 1) šok od transfuzije krvi; 2) oligo-anurija; 3) obnavljanje diureze; 4) oporavak (V. A. Agranenko). Sliku transfuzijskog šoka (period I) karakteriše pad krvnog pritiska, tahikardija, teški respiratorni distres, anurija i pojačano krvarenje, što može dovesti do razvoja krvarenja, posebno ako je u toku operacije izvršena nekompatibilna transfuzija krvi. ili u neposrednim satima nakon toga. U nedostatku racionalne terapije, transfuzijski šok može dovesti do smrti. U drugom periodu stanje bolesnika ostaje teško zbog progresivnog oštećenja bubrežne funkcije, metabolizma elektrolita i vode, sve veće azotemije i pojačane intoksikacije, što često dovodi do smrti. Trajanje ovog perioda je obično od 2 do 3 nedelje i zavisi od težine oštećenja bubrega. Treći period je manje opasan, kada se obnavlja funkcija bubrega i normalizira diureza. U četvrtom periodu (oporavak) anemija traje dugo. U prvom periodu transfuzijskih komplikacija potrebno je suzbiti teške hemodinamske poremećaje i spriječiti negativan utjecaj toksičnih faktora na funkcije vitalnih organa, prvenstveno bubrega, jetre i srca. Ovdje su opravdani masivni metabolički P. do. u dozi do 2-3 litre korištenjem jednogrupe Rh kompatibilne krvi kratkog roka trajanja, poliglucina i kardiovaskularnih lijekova. U drugom periodu (oligurija, anurija, azotemija) terapija treba da bude usmerena na normalizaciju metabolizma vode i elektrolita i suzbijanje intoksikacije i poremećene funkcije bubrega. Pacijentu se daje strogi vodni režim. Unos tečnosti je ograničen na 600 ml dnevno uz dodatak količine tečnosti koju je pacijent izlučio u vidu povraćanja i urina. Hipertonične otopine glukoze (10-20% pa čak i 40%) su indicirane kao tekućine za transfuziju. Ispiranje želuca i sifonski klistir propisuju se najmanje 2 puta dnevno. Uz sve veću azotemiju i pojačanu intoksikaciju, indicirane su zamjenske transfuzije, intraabdominalna i intraintestinalna dijaliza, a posebno hemodijaliza pomoću aparata za umjetni bubreg. U III, a posebno u IV periodima, sprovodi se simptomatska terapija.

Kod nekih pacijenata, ubrzo nakon transfuzije krvi, mogu se razviti posttransfuzijske reakcije, koje, za razliku od komplikacija, nisu praćene dugotrajnom disfunkcijom organa i sistema i ne predstavljaju opasnost po život. Najtipičniji klinički simptomi ovakvih reakcija su opšta slabost, zimica, groznica, bol u donjem delu leđa, mučnina, povraćanje, glavobolja, alergijski osip kao što je urtikarija, svrab kože, oticanje kapaka itd. počinje nakon 20 - 30 minuta nakon transfuzije krvi, ponekad i tokom nje i traje od nekoliko minuta do nekoliko sati. Ovisno o težini kliničkog toka, razlikuju se tri stupnja posttransfuzijskih reakcija: blage, srednje teške i teške. Blagu reakciju karakterizira povećanje tjelesne temperature na 1° u odnosu na početnu, opća malaksalost, groznica, glavobolja i bol u mišićima ekstremiteta. Navedene pojave su kratkotrajne i za njihovo otklanjanje nisu potrebne posebne terapijske mjere. Reakcije nakon transfuzije umjerene težine praćene su povećanjem tjelesne temperature na 1,5 - 2° u odnosu na početnu, pojačanom drhtavicom, ubrzanim otkucajem srca i disanjem. U nekim slučajevima može se pojaviti urtikarija. Bol uzrokovan osnovnom bolešću često se pogoršava. Teške posttransfuzijske reakcije karakteriše povećanje temperature za više od 2° u odnosu na početnu, uz zapanjujuće zimice, cijanozu usana, jaku glavobolju, povraćanje, bol u donjim kostima, otežano disanje, urtikariju, Quiqueov sindrom edem, leukocitoza. Pacijenti kod kojih su se razvile posttransfuzijske reakcije ili imaju razloga za sumnju na njihovu pojavu zahtijevaju obavezni medicinski nadzor i, ako je potrebno, pravovremeno liječenje. U zavisnosti od uzroka nastanka i kliničkog toka, reakcije se razlikuju na pirogene, alergijske i anafilaktičke. Pirogene reakcije nastaju unošenjem pirogena u krv primaoca tokom transfuzije krvi. Do stvaranja pirogena može doći u očuvanoj krvi ili u nedovoljno pripremljenim transfuzijskim sistemima. Pirogene posttransfuzijske reakcije manifestuju se uglavnom opštom slabošću, groznicom i zimicama. U zavisnosti od težine, mogu biti lake, srednje i teške.

Testovi za individualnu kompatibilnost krvi davaoca i primaoca

4.1. Dvostepeni test u epruvetama sa antiglobulinom

4.2. Test kompatibilnosti u avionu na sobnoj temperaturi

4.3. Indirektni Coombsov test

4.4. Test kompatibilnosti sa 10% želatine

4.5. Test kompatibilnosti sa 33% poliglucina

Individualni test kompatibilnosti omogućava vam da se uvjerite da primatelj nema antitijela usmjerena protiv crvenih krvnih zrnaca donora i na taj način sprječava transfuziju crvenih krvnih stanica koje nisu kompatibilne s krvlju pacijenta.

Test kompatibilnosti, koji se izvodi u avionu na sobnoj temperaturi, ima za cilj identifikaciju kompletnih grupnih aglutinina sistema AB0, MNSs, Lewis, itd. Test kompatibilnosti sa 10% želatine, 33% poliglucina, indirektnim Coombsovim testom namijenjen je identifikaciji nepotpunih grupnih antitijela. Dvostepeni test u epruvetama s antiglobulinom uključuje detekciju oba antitijela, uključujući grupne hemolizine.

Najosjetljiviji i najpreporučljiviji je dvostepeni test u epruvetama sa antiglobulinom, zatim kombinacija dva testa - flat test na sobnoj temperaturi i indirektni Coombs test. Umjesto indirektnog Coombsovog testa, može se koristiti reakcija konglutinacije sa 10% želatine ili reakcija konglutinacije sa 33% poliglucina. Posljednji test je inferiorniji po osjetljivosti od prva dva, ali traje manje vremena.

Određivanje krvne grupe (AB0 sistem)

Materijalna oprema: hemaglutinirajući serumi grupe 0ab (I), Ab (II), Ba (III) dvije različite serije, serum grupe AB0 (IV), izotonični rastvor NaCl, pipete, stakalca ili stakleni štapići, tableta za određivanje krvnih grupa , krv donatora, igla za jednokratnu upotrebu, alkohol, vata.

Tehnika određivanja krvnih grupa pomoću standardnih hemaglutinirajućih seruma

Na vrhu tablete upišite prezime i inicijale osobe (subjekta ili davaoca) čija se krvna grupa utvrđuje. Na navlaženu bijelu površinu tablete, u ćelije označene sljedećim simbolima: lijevo - 0ab (I), u sredini - Ab (II), desno - Ba (III), nanesite jednu veliku kap ( 0,1 ml) standardnog seruma I sa pipetom, II, III grupe, koji sadrži aglutinine I - a i b; II - b i III - a. S obzirom da se koriste standardni serumi iz dvije različite serije svake grupe, dobije se ukupno 6 kapi koje formiraju dva reda od po tri kapi sljedećim redoslijedom s lijeva na desno: 0ab (I), Ab (II) i Ba (III ). Koristeći suvu staklenu šipku ili ivicu stakalca, jedna mala kap (0,01 ml), otprilike 10-20 puta manja od kapi seruma, prenosi se u ćelije pored kapi standardnog seruma. Odnos treba da bude 1:10, tj. 1 dio krvi, 10 dijelova seruma.

Koristeći drugu staklenu šipku (ili drugu ivicu stakalca), pomiješajte kap krvi sa serumom grupe 0ab (I) dok smjesa ne dobije jednoličnu ružičastu boju. Pomoću sledećeg staklenog štapića (drugi ugao stakla) pomešati sledeću kap krvi sa serumom grupe Ab (II) i takođe nastaviti sa serumom grupe Ba (III). Krv je također pomiješana sa serumom u drugom redu.

Nakon miješanja kapi, promućkajte tabletu, a zatim je ostavite na miru 1 minut i ponovo povremeno protresite. Promatranje tijeka reakcije vrši se blagim mućkanjem tablete 5 minuta. Aglutinacija se obično javlja unutar prvih 19-30 sekundi, ali se posmatranje provodi najmanje 5 minuta zbog mogućnosti kasnog početka aglutinacije u slučaju slabe aglutinacije eritrocita (A 2 ili A 2 B).

Rezultat reakcije u svakoj kapi može biti pozitivan (+) ili negativan (-).

Pozitivan rezultat (+) se izražava u aglutinaciji (sljepljivanju) crvenih krvnih zrnaca; Aglutinati su vidljivi golim okom, prvo u obliku malih crvenih zrnaca, koji se postepeno spajaju u veće ljuspice. U tom slučaju, serum postepeno gubi boju. Kako dođe do aglutinacije, ali ne ranije od 3 minute, ovim kapima se dodaje jedna velika kap (0,1 ml) fiziološke otopine NaCl kako bi se uništila lažna aglutinacija koja se ponekad javlja - nespecifično lijepljenje crvenih krvnih zrnaca u tzv. Tableta se ljulja i ispitivanje se nastavlja dok ne prođe 5 minuta.

U slučajevima kada se sa standardnim serumima sve tri grupe (u svim kapima) dobije pozitivan rezultat, da bi se isključila nespecifična aglutinacija, vrši se dodatno ispitivanje test eritrocita standardnim serumom grupe AB 0 (IV), koji ne daje rezultate. sadrže grupne aglutinine. Za to se jedna velika kap (0,1 ml) seruma grupe AB 0 (IV) nanese na površinu 7. ćelije, a pored nje je mala kap (0,01 ml) krvi. Krv se pomiješa sa serumom i reakcija se ispituje 5 minuta uz mućkanje tablete. Samo odsustvo aglutinacije sa serumom grupe AB 0 (IV) omogućava nam da smatramo istinitim pozitivan rezultat reakcije sa serumima 0ab (I), Ab (II) i Ba (III).

Krvna grupa se određuje ovisno o prisutnosti ili odsustvu reakcije izohemaglutinacije. Za procjenu rezultata pogledajte sliku 1.

Rezultati reakcija u serumskim kapima mogu dati četiri različite kombinacije pozitivnih i negativnih reakcija.

1. Ako su serumi sve tri grupe dali negativnu reakciju, tj. sve smjese su ostale ujednačeno ružičaste boje bez znakova aglutinacije, tada ispitivana krv ne sadrži aglutinogene i, prema tome, pripada grupi 0ab (I).

2. Ako su serumi grupe 0ab (I) i Ba (III) dali pozitivnu reakciju, a serum grupe Ab (II) negativnu, onda ispitivana krv sadrži aglutinogen A i ova krv pripada grupi Ab (II) .

3. Ako su serumi grupe 0ab (I) i Ab (II) dali pozitivnu reakciju, a serum grupe Ba (III) negativnu, tada se u test krvi nalazi aglutinogen B, tj. pripada Ba(III) grupi.

4. Ako su serumi sve tri grupe dali pozitivnu reakciju, to znači da test krvi sadrži oba aglutinogena - A i B - i da pripada grupi AB 0 (IV), pod uslovom da je u roku od 5 minuta krv ove grupe sa serum grupe AB 0 (IV) u 7. ćeliji nije dao aglutinaciju.

Izražavanje praktičnog rezultata:

Krvna grupa se bilježi prema pravilima općenito prihvaćenim u zemljama ZND uz obaveznu naznaku slovne oznake identificiranih aglutinogena (aglutinogena), zatim - aglutinina i u zagradi rimskim brojem - grupe. Na primjer, krvna grupa Ivanova I.P. - 0ab (I), ili Ab (II), ili Ba (III), ili AB 0 (IV).

Rezultat reakcije sa standardnim grupnim serumima	Krv koja se testira pripada toj grupi
Oab	Ab	Ba
(-)	(-)		o(ja)
(-)	(-)	(-)
(+)	(-)	(+)	A(II)
(+)		(+)
(+)	(+)	(-)	B(III)
(+)	(+)	(-)
(+)	(+)	(+)	AB(IV)
(+)	(+)	(+)
Kontrola sa serumom grupe AB(IV) (-)

Slika 1. Procjena rezultata krvnih grupa korištenjem ABO sistema

Određivanje krvne grupe ciklonima: algoritam

Sve u ljudskom tijelu je određeno proizvodnjom raznih supstanci. Krvna grupa nije izuzetak, čija vrsta zavisi od antigenskog sastava crvenih krvnih zrnaca.

Moderna medicina se ubrzano razvija, a određivanje krvne grupe više nije novost. Postoji mnogo metoda za njegovo određivanje. Jedan od najčešće korištenih je određivanje krvne grupe pomoću ciklona.

Šta je to?

Zoliklon je posebno antitijelo koje reagira s antigenima koji se nalaze na površini membrane crvenih krvnih zrnaca. Za njihovo dobivanje koriste se metode genetskog inženjeringa - prvo se dobivaju posebne bakterije koje se unose u tijelo miševa. Nakon imunizacije mišjeg tijela, oni dobijaju njegovu ascitnu tekućinu iz koje se naknadno izoluju potrebna antitijela.

Oni su imunoglobulini klase M.

Zahvaljujući posebnoj tehnologiji proizvodnje, zolikloni su epidemiološki sigurni za ljude.

Supstanca je dostupna u obliku otopine vode i soli, koja se dodaje postojećim uzorcima krvi. Svaka grupa antigena ima svoj rastvor tsoliklona - anti-A tsoliklon je ružičast, anti-B je plavi, a anti-D tsoliklon je bezbojan.

Lijekovi su dobili ime po nazivu mjesta gdje su stvoreni - Centralnog Lenjinovog instituta za transfuziju krvi u Moskvi.

Metoda određivanja

Određivanje krvne grupe zoliklonima može se vršiti u nativnoj krvi sa ili bez dodatka konzervansa, kao i u proučavanju kapilarne krvi uzete iz prsta. Direktno određivanje grupe provodi se na posebnoj ploči ili tableti.

Prije svega, kap otopine zoliklona se nanosi na tabletu ispod odgovarajuće oznake. Kap krvi koja se ispituje stavlja se pored rastvora zoliklona i pomeša se. Određivanje krvne grupe pomoću zoliklona vrši se ravnomjernim ljuljanjem ploče s jedne na drugu stranu. Vizuelno se uočava aglutinacija crvenih krvnih zrnaca (sljepljivanje). Ako je rezultat negativan, ne dolazi do aglutinacije.

Postupak se mora provesti uz određeni temperaturni režim - od 15 do 25 stepeni Celzijusa pod normalnim osvjetljenjem. Prije izvođenja postupka provjerite da zolikloni nisu istekli.

U nekim ustanovama, radi kontrole lijekova, neophodno je evidentirati vrijeme otvaranja proizvoda i rok trajanja. Preporučuje se dokumentovati rok trajanja reagensa ako se tipizacija krvi vrši pomoću ciklona. Fotografije rabljenih boca rijetko se snimaju, ali je i takvo snimanje moguće.

Interpretacija rezultata

Već nakon testa možete saznati koju krvnu grupu ima pacijent.

Kakvi su rezultati studije ako je krvna grupa određena pomoću zoliklona? Tabela koja upoređuje zoliklon i krvnu grupu omogućava vam razumijevanje dobivenih rezultata.

zolicone

Kao što se može vidjeti iz tabele, ako je došlo do aglutinacije u ćeliji ploče pod brojem 3 ili 4, onda je krv druge grupe (aglutinacija je izvršena zbog interakcije antigena A koji se nalazi na membrani eritrocita i posebnog antitelo prisutno u rastvoru anti-A-zoliklona). Prema tome, ako se aglutinacija primijeti u ćeliji broj 5 ili 6, tada je krvna grupa treća. Ako nije došlo do aglutinacije ni u jednom od navedenih sektora, to znači da krv koja se testira nema antigene, što upućuje na zaključak da je krvna grupa prva.

Moguće je da dođe do aglutinacije u svim bunarima. Obično to ukazuje na nekvalitetan lijek ili kršenje pravila istraživanja.

Zašto se određivanje krvne grupe vrši pomoću zoliklona?

Trenutno se zolikloni prvenstveno koriste za određivanje krvne grupe i Rh faktora. Studija se može izvesti prema planu, prema preporuci lokalnog liječnika ili za hitne indikacije kada je potrebna transfuzija krvi (masivnog gubitka krvi je došlo tijekom operacije ili je pacijent porođen sa opsežnom traumom i masivnim krvarenjem).

U klinici se grupno određivanje provodi uglavnom korištenjem seruma. Krvna grupa na osnovu ciklona najčešće se utvrđuje u bolnici ili specijalizovanim laboratorijama.

Korištenju zoliklona obično se pribjegava kada je nemoguće koristiti serume.

Brzina dobijanja rezultata je nešto veća nego kod testiranja sa standardnim serumima, što tehniku ​​čini univerzalnijom. Mnoge laboratorije pokušavaju preći na korištenje ove metode.

Zoliclon preparati

Koje vrste koliklonalnih lijekova postoje?

Postoje eritrotest-zolikon anti-D (postoje tri varijante - super, koji izaziva direktnu aglutinaciju, samo anti-D-zolikon, kada se doda, razvija se indirektna aglutinacija i anti-D-mix lijek, koji sadrži komponente prvog dva). Oni omogućuju ne samo određivanje krvne grupe pomoću ciklona, ​​već i identifikaciju Rhesus pripadnosti.

Ostala rješenja se razlikuju isključivo po imenu, jer antitijela koja sadrže - imunoglobulini klasa M i G - dozvoljavaju tipizaciju krvi samo pomoću standardnih, AB0, antigena. Razlika između njih je samo u mehanizmu adhezije crvenih krvnih zrnaca (direktna ili indirektna aglutinacija).

Svaki od ovih lijekova ima rok trajanja i karakteristike upotrebe. Međutim, samo tri gore navedena lijeka (anti-A, anti-B, anti-D) se najviše koriste u kliničkoj laboratorijskoj dijagnostici.

Netačna interpretacija rezultata

Ponekad je moguće dobiti lažne, nepouzdane rezultate. Na primjer, došlo je do aglutinacije u svim stanicama tablete ili kada je krv dodana u pripravak, na primjer, njihova boja se promijenila.

Da bi se spriječili takvi rezultati, ako se određivanje krvne grupe provodi pomoću zoliklona, ​​algoritam postupka predviđa neka pravila. Prije svega, treba obratiti pažnju na rok trajanja zoliklona. Ne smiju se koristiti reagensi kojima je istekao rok trajanja.

Takođe se moraju poštovati uslovi postupka. Prostorija mora biti opremljena radnim mjestom s dovoljno osvjetljenja i temperaturnih uslova. Ako upute za lijek također opisuju potrebnu vlažnost u prostoriji, to se također mora uzeti u obzir.

Važna je i čistoća radne tablete, čija kontaminacija često dovodi do grešaka u istraživanju i netočnih rezultata.

Gdje možete provesti istraživanje?

Određivanje krvne grupe zoliklonima postaje sve raširenije. Ako se ranije ovaj postupak provodio samo u specijaliziranim bolnicama (na primjer, posebno na odjelima kirurgije i hematologije), sada je ovaj postupak dostupan u gotovo svakoj opremljenoj laboratoriji.

Ova tehnika počinje da se širi u polikliničkoj mreži za ekspresno određivanje krvne grupe i brzu dijagnozu pacijenta.

Mnogi privatni medicinski i kozmetološki centri nude ovu uslugu uz naknadu. Postupak je, kao što je već spomenuto, besplatan, uz uputnicu terapeuta.

Ako nije moguće otići na kliniku, kako onda pomoću zoliklona odrediti svoju krvnu grupu? Ako kod kuće imate posebnu tabletu i set lijekova, možete sami provesti studiju, sjećajući se, međutim, na potrebu poštivanja uvjeta postupka, a posebno steriliteta.

Funkcije. Krvne grupe su genetski naslijeđene karakteristike koje se ne mijenjaju tokom života u prirodnim uslovima. Krvna grupa je specifična kombinacija površinskih antigena eritrocita (aglutinogena) ABO sistema.Određivanje pripadnosti grupi se široko koristi u kliničkoj praksi pri transfuziji krvi i njenih komponenti, u ginekologiji i akušerstvu pri planiranju i vođenju trudnoće. AB0 sistem krvnih grupa je glavni sistem koji određuje kompatibilnost i nekompatibilnost transfuzirane krvi, jer njeni sastavni antigeni su najimunogeniji. Karakteristika AB0 sistema je da u plazmi neimunih ljudi postoje prirodna antitela na antigen kojih nema na crvenim krvnim zrncima. AB0 sistem krvnih grupa sastoji se od dvije grupe aglutinogena eritrocita (A i B) i dva odgovarajuća antitijela - aglutinina plazme alfa (anti-A) i beta (anti-B). Različite kombinacije antigena i antitijela formiraju 4 krvne grupe:

• Grupa 0(I) - nema grupnih aglutinogena na crvenim krvnim zrncima, aglutinini alfa i beta su prisutni u plazmi.
• Grupa A (II) - crvena krvna zrnca sadrže samo aglutinogen A, aglutinin beta je prisutan u plazmi;
• Grupa B (III) - crvena krvna zrnca sadrže samo aglutinogen B, plazma sadrži aglutinin alfa;
• Grupa AB (IV) - antigeni A i B su prisutni na crvenim krvnim zrncima, plazma ne sadrži aglutinine.

Određivanje krvnih grupa vrši se identifikacijom specifičnih antigena i antitijela (dvostruka metoda, odnosno unakrsna reakcija).

Krvna inkompatibilnost se opaža ako crvena krvna zrnca jedne krvi nose aglutinogene (A ili B), a plazma druge krvi sadrži odgovarajuće aglutinine (alfa ili beta) i dolazi do reakcije aglutinacije.

Transfuzija crvenih krvnih zrnaca, plazme, a posebno pune krvi od davaoca ka primaocu mora se strogo poštovati u grupnoj kompatibilnosti. Kako bi se izbjegla nekompatibilnost krvi davatelja i primatelja, potrebno je laboratorijskim metodama precizno odrediti njihove krvne grupe. Najbolje je transfuzirati krv, crvena krvna zrnca i plazmu iste grupe koja je određena za primaoca. U hitnim slučajevima, crvena krvna zrnca grupe 0 (ali ne puna krv!) mogu se transfuzirati primaocima s drugim krvnim grupama; Crvena krvna zrnca grupe A mogu se transfuzirati primaocima s krvnom grupom A i AB, a crvena krvna zrnca donatora grupe B mogu se transfuzirati primaocima grupe B i AB.

Kartice kompatibilnosti krvnih grupa (aglutinacija je označena znakom +):

Krv donatora	Krv primaoca

Crvena krvna zrnca donora	Krv primaoca

Grupni aglutinogeni nalaze se u stromi i membrani eritrocita. Antigeni ABO sistema se detektuju ne samo na crvenim krvnim zrncima, već i na ćelijama drugih tkiva ili se čak mogu rastvoriti u pljuvački i drugim telesnim tečnostima. Razvijaju se u ranim fazama intrauterinog razvoja, a već su prisutne u značajnim količinama kod novorođenčeta. Krv novorođene djece ima starosne karakteristike - karakteristične grupe aglutinina možda još nisu prisutne u plazmi, koji se kasnije počinju proizvoditi (konstantno se otkrivaju nakon 10 mjeseci) i određivanje krvne grupe kod novorođenčadi u ovom slučaju se vrši. izlaze samo prisustvom antigena ABO sistema.

Pored situacija koje uključuju potrebu za transfuzijom krvi, određivanje krvne grupe, Rh faktora i prisutnost aloimunih antieritrocitnih antitijela treba provesti tijekom planiranja ili tijekom trudnoće kako bi se utvrdila vjerovatnoća imunološkog sukoba između majke i djeteta, što može dovesti do hemolitičke bolesti novorođenčeta.

Hemolitička bolest novorođenčeta

Hemolitička žutica novorođenčadi, uzrokovana imunološkim sukobom između majke i fetusa zbog nekompatibilnosti antigena eritrocita. Bolest je uzrokovana nekompatibilnošću fetusa i majke za D-Rhesus ili ABO antigene, rjeđe postoji nekompatibilnost za druge Rhesus (C, E, c, d, e) ili M-, M-, Kell-, Duffy- , Kidd- antigeni. Bilo koji od ovih antigena (obično D-Rh antigen), koji prodire u krv Rh negativne majke, uzrokuje stvaranje specifičnih antitijela u njenom tijelu. Potonji ulaze u fetalnu krv kroz placentu, gdje uništavaju odgovarajuća crvena krvna zrnca koja sadrže antigen.Predisponiraju nastanku hemolitičke bolesti novorođenčeta poremećenom propusnošću placente, ponovljenim trudnoćama i transfuzijama krvi ženi bez uzimanja u obzir Rh faktor itd. Uz rane manifestacije bolesti, imunološki sukob može uzrokovati prijevremeni porođaj ili pobačaj.

Postoje varijante (slabe varijante) antigena A (u većoj meri) i ređe antigena B. Što se tiče antigena A, postoje opcije: „jaki“ A1 (više od 80%), slabi A2 (manje od 20%) ), pa čak i slabije (A3, A4, Ah - rijetko). Ovaj teorijski koncept je važan za transfuziju krvi i može uzrokovati nezgode kada se donor A2 (II) svrstava u grupu 0 (I) ili donor A2B (IV) u grupu B (III), budući da slab oblik antigena A ponekad uzrokuje greške u određivanje krvnih grupa ABO sistema. Ispravna identifikacija slabih varijanti antigena A može zahtijevati ponovljeno testiranje sa specifičnim reagensima.

Smanjenje ili potpuni nedostatak prirodnih aglutinina alfa i beta ponekad se primjećuje u stanjima imunodeficijencije:

• neoplazme i bolesti krvi - Hodgkinova bolest, multipli mijelom, kronična limfna leukemija;
• kongenitalna hipo- i agamaglobulinemija;
• kod male djece i starijih osoba;
• imunosupresivna terapija;
• teške infekcije.

Poteškoće u određivanju krvne grupe zbog supresije reakcije hemaglutinacije nastaju i nakon uvođenja plazma nadomjestaka, transfuzije krvi, transplantacije, septikemije itd.

Nasljeđivanje krvnih grupa

Zakoni nasljeđivanja krvnih grupa temelje se na sljedećim konceptima. Postoje tri moguće varijante (alela) na lokusu gena ABO - 0, A i B, koje su eksprimirane na autozomno kodominantni način. To znači da osobe koje su naslijedile gene A i B eksprimiraju proizvode oba ova gena, što rezultira fenotipom AB (IV). Fenotip A (II) može biti prisutan kod osobe koja je od roditelja naslijedila ili dva gena A, ili gene A i 0. Shodno tome, fenotip B (III) - kada nasljeđuje ili dva gena B, ili B i 0. Fenotip 0 ( I) pojavljuje se kod nasljeđivanja dva gena 0. Dakle, ako oba roditelja imaju krvnu grupu II (genotipovi AA ili A0), jedno od njihove djece može imati prvu grupu (genotip 00). Ako jedan od roditelja ima krvnu grupu A(II) sa mogućim genotipom AA i A0, a drugi ima B(III) sa mogućim genotipom BB ili B0, djeca mogu imati krvne grupe 0(I), A(II) , B(III) ) ili AB (!V).

• Hemolitička bolest novorođenčadi (otkrivanje nekompatibilnosti krvi majke i fetusa prema AB0 sistemu);
• Preoperativna priprema;
• Trudnoća (priprema i praćenje trudnica sa negativnim Rh faktorom)

Priprema za studij: nije potrebna

Ako je potrebno (detekcija podtipa A2), provodi se dodatna ispitivanja pomoću specifičnih reagenasa.

Vrijeme izvođenja: 1 dan

Rezultat istraživanja:

• 0 (I) - prva grupa,
• A (II) - druga grupa,
• B (III) - treća grupa,
• AB (IV) - četvrta krvna grupa.

Kada se identifikuju podtipovi (slabe varijante) grupnih antigena, rezultat se daje uz odgovarajući komentar, na primjer, „identificirana je oslabljena varijanta A2, potrebna je individualna selekcija krvi“.

Rh faktor Rh

Glavni površinski eritrocitni antigen Rh sistema, kojim se procjenjuje Rh status osobe.

Funkcije. Rh antigen je jedan od eritrocitnih antigena Rh sistema koji se nalazi na površini eritrocita. Postoji 5 glavnih antigena u Rh sistemu. Glavni (najimunogeniji) antigen je Rh (D), koji se obično naziva Rh faktor. Crvena krvna zrnca otprilike 85% ljudi nose ovaj protein, pa se klasificiraju kao Rh pozitivne (pozitivne). 15% ljudi ga nema i Rh negativno (Rh negativno). Prisustvo Rh faktora ne zavisi od pripadnosti grupi po sistemu AB0, ne menja se tokom života i ne zavisi od spoljnih razloga. Pojavljuje se u ranim fazama intrauterinog razvoja, a već se nalazi u značajnoj količini kod novorođenčeta. Određivanje Rh krvi koristi se u opštoj kliničkoj praksi prilikom transfuzije krvi i njenih komponenti, kao i u ginekologiji i akušerstvu prilikom planiranja i vođenja trudnoće.

Nekompatibilnost krvi prema Rh faktoru (Rh konflikt) tokom transfuzije krvi se uočava ako crvena krvna zrnca donora nose Rh aglutinogen, a primatelj je Rh negativan. U ovom slučaju, Rh-negativni primalac počinje proizvoditi antitijela usmjerena protiv Rh antigena, što dovodi do uništenja crvenih krvnih stanica. Transfuzije crvenih krvnih zrnaca, plazme, a posebno pune krvi od davaoca primatelju moraju strogo poštovati kompatibilnost ne samo po krvnoj grupi, već i po Rh faktoru. Prisustvo i titar antitijela na Rh faktor i druga aloimunska antitijela koja su već prisutna u krvi može se odrediti specificiranjem testa "anti-Rh (titar)".

Određivanje krvne grupe, Rh faktora i prisustva aloimunih antieritrocitnih antitijela potrebno je provesti prilikom planiranja ili tijekom trudnoće kako bi se utvrdila vjerovatnoća imunološkog sukoba između majke i djeteta, koji može dovesti do hemolitičke bolesti novorođenčeta. Pojava Rh konflikta i razvoj hemolitičke bolesti novorođenčadi moguća je ako je trudnica Rh negativna, a fetus Rh pozitivan. Ako je majka Rh +, a fetus Rh negativan, ne postoji opasnost od hemolitičke bolesti za fetus.

Hemolitička bolest fetusa i novorođenčadi- hemolitička žutica novorođenčadi, uzrokovana imunološkim sukobom između majke i fetusa zbog nekompatibilnosti antigena eritrocita. Bolest može biti uzrokovana nekompatibilnošću fetusa i majke za D-Rhesus ili ABO antigene, rjeđe postoji nekompatibilnost za druge Rhesus (C, E, c, d, e) ili M-, N-, Kell-, Duffy -, Kidd antigeni (prema statistici, 98% slučajeva hemolitičke bolesti novorođenčadi povezano je sa D - Rh antigenom). Bilo koji od ovih antigena, koji prodire u krv Rh negativne majke, uzrokuje stvaranje specifičnih antitijela u njenom tijelu. Potonji ulaze u fetalnu krv kroz placentu, gdje uništavaju odgovarajuća crvena krvna zrnca koja sadrže antigen. Predispozicija za razvoj hemolitičke bolesti novorođenčadi je poremećena propusnost placente, ponovljene trudnoće i transfuzije krvi ženi bez uzimanja u obzir Rh faktora itd. Kod ranih manifestacija bolesti imunološki sukob može uzrokovati prijevremeni porođaj ili ponovljene pobačaje.

Trenutno postoji mogućnost medicinske prevencije razvoja Rh konflikta i hemolitičke bolesti novorođenčadi. Sve Rh negativne žene tokom trudnoće treba da budu pod medicinskim nadzorom. Takođe je potrebno pratiti nivo Rh antitela tokom vremena.

Postoji mala kategorija Rh-pozitivnih osoba koje su u stanju da formiraju anti-Rh antitela. To su osobe čija crvena krvna zrnca karakterizira značajno smanjena ekspresija normalnog Rh antigena na membrani (“slabi” D, Dweak) ili ekspresija izmijenjenog Rh antigena (parcijalni D, Dpartial). U laboratorijskoj praksi ove slabe varijante D antigena se kombinuju u Du grupu, čija je učestalost oko 1%.

Primatelje koji sadrže Du antigen treba klasificirati kao Rh-negativne i treba im transfuzirati samo Rh-negativnu krv, budući da normalan D antigen može izazvati imuni odgovor kod takvih osoba. Donori sa Du antigenom kvalifikuju se kao Rh-pozitivni davaoci, jer transfuzija njihove krvi može izazvati imuni odgovor kod Rh negativnih primaoca, au slučaju prethodne senzibilizacije na D antigen, teške transfuzijske reakcije.

Nasljeđivanje Rh faktora krvi.

Zakoni nasljeđivanja zasnovani su na sljedećim konceptima. Gen koji kodira Rh faktor D (Rh) je dominantan, alelni gen d je recesivan (Rh-pozitivne osobe mogu imati DD ili Dd genotip, Rh-negativne osobe mogu imati samo dd genotip). Osoba prima po 1 gen od svakog roditelja - D ili d, i tako ima 3 opcije genotipa - DD, Dd ili dd. U prva dva slučaja (DD i Dd) test krvi na Rh faktor će dati pozitivan rezultat. Samo sa dd genotipom osoba će imati Rh negativnu krv.

Razmotrimo neke varijante kombinacije gena koji određuju prisustvo Rh faktora kod roditelja i djece

• 1) Otac je Rh pozitivan (homozigot, genotip DD), majka je Rh negativna (genotip dd). U ovom slučaju, sva djeca će biti Rh pozitivna (100% vjerovatnoća).
• 2) Otac je Rh pozitivan (heterozigot, genotip Dd), majka je Rh negativna (genotip dd). U ovom slučaju, vjerovatnoća da ćete imati dijete sa negativnim ili pozitivnim Rh je ista i jednaka je 50%.
• 3) Otac i majka su heterozigoti za ovaj gen (Dd), oboje su Rh pozitivni. U ovom slučaju moguće je (sa vjerovatnoćom od oko 25%) roditi dijete sa negativnim Rh.

Indikacije za analizu:

• Određivanje transfuzijske kompatibilnosti;
• Hemolitička bolest novorođenčadi (otkrivanje nekompatibilnosti krvi majke i fetusa prema Rh faktoru);
• Preoperativna priprema;
• Trudnoća (prevencija Rh konflikta).

Priprema za studij: nije potrebna.

Materijal za istraživanje: puna krv (sa EDTA)

Metoda određivanja: Filtracija uzoraka krvi kroz gel impregniran monoklonskim reagensima - aglutinacija + gel filtracija (kartice, crossover metoda).

Vrijeme izvođenja: 1 dan

Interpretacija rezultata:

Rezultat je dat u obliku:
Rh + pozitivan Rh - negativan
Kada se otkriju slabi podtipovi antigena D (Du), izdaje se komentar: „Detektovan je slab Rh antigen (Du), preporučuje se transfuzija Rh negativne krvi ako je potrebno.

Anti-Rh (aloimuna antitela na Rh faktor i druge antigene eritrocita)

Antitela na klinički najvažnije antigene eritrocita, prvenstveno na Rh faktor, što ukazuje na senzibilizaciju organizma na ove antigene.

Funkcije. Rh antitijela pripadaju takozvanim aloimunim antitijelima. Aloimuna antieritrocitna antitela (na Rh faktor ili druge eritrocitne antigene) pojavljuju se u krvi pod posebnim uslovima - nakon transfuzije imunološki nekompatibilne krvi donora ili tokom trudnoće, kada fetalna crvena krvna zrnca nose očinske antigene koji su imunološki strani majci prodiru kroz placentu u krv žene. Neimuni Rh negativni ljudi nemaju antitijela na Rh faktor. U Rh sistemu postoji 5 glavnih antigena, od kojih je glavni (najimunogeniji) antigen D (Rh), koji se obično naziva Rh faktor. Pored antigena Rh sistema, postoji niz klinički važnih antigena eritrocita na koje može doći do senzibilizacije, što može uzrokovati komplikacije tokom transfuzije krvi. Metoda skrininga krvi na prisustvo aloimunih antieritrocitnih antitela, koja se koristi u INVITRO-u, omogućava da se pored antitela na Rh faktor RH1(D) detektuju i aloimuna antitela na druge antigene eritrocita u test serumu.

Gen koji kodira Rh faktor D (Rh) je dominantan, alelni gen d je recesivan (Rh-pozitivne osobe mogu imati DD ili Dd genotip, Rh-negativne osobe mogu imati samo dd genotip). U trudnoći Rh negativne žene sa Rh pozitivnim fetusom moguć je razvoj imunološkog konflikta između majke i fetusa zbog Rh faktora. Rh konflikt može dovesti do pobačaja ili razvoja hemolitičke bolesti fetusa i novorođenčadi. Stoga, određivanje krvne grupe, Rh faktora, kao i prisutnost aloimunih antieritrocitnih antitijela treba provoditi prilikom planiranja ili tokom trudnoće kako bi se utvrdila vjerovatnoća imunološkog konflikta između majke i djeteta. Pojava Rh konflikta i razvoj hemolitičke bolesti novorođenčadi moguća je ako je trudnica Rh negativna, a fetus Rh pozitivan. Ako majka ima pozitivan Rh antigen, a fetus negativan, sukob oko Rh faktora se ne razvija. Incidencija Rh inkompatibilnosti je 1 slučaj na 200-250 porođaja.

Hemolitička bolest fetusa i novorođenčadi je hemolitička žutica novorođenčadi, uzrokovana imunološkim sukobom između majke i fetusa zbog nekompatibilnosti antigena eritrocita. Bolest je uzrokovana nekompatibilnošću fetusa i majke za D-Rhesus ili ABO (grupe) antigene, rjeđe postoji nekompatibilnost za druge Rhesus (C, E, c, d, e) ili M-, M-, Kell- , Duffy-, Kidd antigeni. Bilo koji od ovih antigena (obično D-Rh antigen), koji prodire u krv Rh negativne majke, uzrokuje stvaranje specifičnih antitijela u njenom tijelu. Prodor antigena u krvotok majke olakšavaju infektivni faktori koji povećavaju propusnost posteljice, manje ozljede, krvarenja i druga oštećenja posteljice. Potonji ulaze u fetalnu krv kroz placentu, gdje uništavaju odgovarajuća crvena krvna zrnca koja sadrže antigen. Predispozicija za nastanak hemolitičke bolesti novorođenčadi je poremećena propusnost placente, ponovljene trudnoće i transfuzije krvi ženi bez uzimanja u obzir Rh faktora itd. Kod ranih manifestacija bolesti imunološki sukob može uzrokovati prijevremeni porođaj ili spontani pobačaj.

Tokom prve trudnoće sa Rh pozitivnim fetusom, trudnica sa Rh "-" ima 10-15% rizik od razvoja Rh konflikta. Dolazi do prvog susreta majčinog tijela sa stranim antigenom, akumulacija antitijela se odvija postepeno, počevši od otprilike 7-8 sedmice trudnoće. Rizik od inkompatibilnosti raste sa svakom sljedećom trudnoćom s Rh pozitivnim fetusom, bez obzira na to kako je završila (inducirani pobačaj, pobačaj ili porođaj, operacija vanmaterične trudnoće), s krvarenjem tijekom prve trudnoće, uz ručno odvajanje posteljice, kao i ako je porođaj obavljen carskim rezom ili praćen značajnim gubitkom krvi. s transfuzijama Rh-pozitivne krvi (ako su provedene čak iu djetinjstvu). Ako se naredna trudnoća razvije s Rh negativnim fetusom, nekompatibilnost se ne razvija.

Sve trudnice sa Rh "-" stavljaju se na posebnu registraciju u prenatalnu ambulantu i vrši se dinamičko praćenje nivoa Rh antitela. Prvi put se test na antitela mora uraditi od 8. do 20. nedelje trudnoće, a zatim periodično proveravati titar antitela: jednom mesečno do 30. nedelje trudnoće, dva puta mesečno do 36. nedelje i jednom nedeljno do 36. sedmice. Prekid trudnoće na manje od 6-7 nedelja ne može dovesti do stvaranja Rh antitela kod majke. U ovom slučaju, tokom sljedeće trudnoće, ako fetus ima pozitivan Rh faktor, vjerovatnoća razvoja imunološke nekompatibilnosti ponovno će biti 10-15%.

Testiranje na aloimuna antieritrocitna antitela je takođe važno u opštoj preoperativnoj pripremi, posebno za osobe koje su prethodno primale transfuziju krvi.

Indikacije za analizu:

• Trudnoća (prevencija Rh konflikta);
• Praćenje trudnica sa negativnim Rh faktorom;
• Pobačaj;
• Hemolitička bolest novorođenčadi;
• Priprema za transfuziju krvi.

Priprema za studij: nije potrebna.
Materijal za istraživanje: puna krv (sa EDTA)

Metoda određivanja: aglutinacija + metoda gel filtracije (kartice). Inkubacija standardno tipiziranih eritrocita sa test serumom i filtracija centrifugiranjem smjese kroz gel impregniran polispecifičnim antiglobilinskim reagensom. Aglutinirana crvena krvna zrnca otkrivaju se na površini gela ili u njegovoj debljini.

Metoda koristi suspenzije eritrocita iz grupe 0(1) donora, tipiziranih prema antigenima eritrocita RH1(D), RH2(C), RH8(Cw), RH3(E), RH4(c), RH5(e), KEL1 ( K), KEL2(k), FY1(Fy a) FY2(Fy b), JK (Jk a), JK2(Jk b), LU1 (Lu a), LU2 (LU b), LE1 (LE a), LE2 (LE b), MNS1(M), MNS2 (N), MNS3 (S), MNS4(s), P1 (P).

Vrijeme izvođenja: 1 dan

Kada se otkriju aloimuna antieritrocitna antitijela, vrši se njihovo polukvantitativno određivanje.
Rezultat se daje u titrima (maksimalno razrjeđenje seruma pri kojem je još uvijek otkriven pozitivan rezultat).

Mjerne jedinice i faktori konverzije: U/ml

Referentne vrijednosti: negativne.

Pozitivan rezultat: Preosjetljivost na Rh antigen ili druge antigene eritrocita.